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[摘要] 目的 建立依折麦布含量测定方法。 方法 采用高效液相色谱法，以Agilent SB-C18（5μm，150mm×4.6mm）为色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-四氢呋喃（65∶25∶10）为流动相；检测波长为232nm，柱温为25℃，流速为1.0mL/min。 结果 含量测定方法学研究表明，该方法专属性好；依折麦布在40.23～402.30μg/mL的浓度范围内与其峰响应值呈良好的线性关系，平均回收率为98.8%（RSD=0.3%）。 结论 本方法测定结果准确，精密度高，耐用性良好，可以作为依折麦布的含量测定方法。
[关键词] 依折麦布；含量测定；高效液相色谱法
[中图分类号] R914 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）12-108-04
依折麦布（Ezetimibe）是胆固醇吸收抑制剂，主要降低低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的血浆浓度[1-3]，阻断胆固醇外源性吸收途径，适用于治疗原发性高胆固醇血症[4-5]，纯合子家族性高胆固醇血症（HoFH）和纯合子谷甾醇血症（或植物甾醇血症），疗效较好，安全性也较好[6]。本研究建立了HPLC含量测定方法，为依折麦布的进一步研究提供了可靠的分析方法和理论依据。
1 试药与仪器
1.1 试药
依折麦布对照品，来源于印度TEVA，依折麦布片及空白辅料片，由扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司提供；乙腈（色谱纯）、氢氧化钠（分析纯）、四氢呋喃（色谱纯）、盐酸（分析纯）、冰醋酸（分析纯）、磷酸二氢钾（分析纯）。
1.2 仪器
Agilent 1260型高效液相色谱仪，Agilent 1260DAD紫外吸收检测器，XS 205电子天平。
2 含量测定方法
2.1 色谱条件
照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD[7]），以Agilent SB-C18（5μm，150mm×4.6mm）为色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-四氢呋喃（65∶25∶10）为流动相；检测波长为232nm，柱温为25℃，流速为1.0mL/min。
2.2 样品配制
系统适用性试验溶液：称取依折麦布对照品20mg，置100mL两瓶中，加0.01mol/L乙醇制氢氧化钠溶液10mL使溶解，密塞，于55℃加热15min，取出，立即加0.1mol/L盐酸溶液2mL及溶剂[冰醋酸-乙腈-水（0.1∶60∶40），下同]适量，放冷，用溶剂定容，摇匀，作为系统适用性试验溶液[8-9]。
供试品溶液：取本品20片，研细，取粉末适量（约相当于依折麦布10mg），精密称定，置50mL量瓶中，加溶剂适量，超声30min，振摇45min，用溶剂定容，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
对照品溶液：取依折麦布对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释成浓度为0.2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。
2.3 含量测定
系统适用性试验：照高效液相色谱法[10]，精密量取系统适用性试验溶液30μL，注入色谱仪，记录色谱图，主峰相对保留时间为1.13的色谱峰，与主峰的分离度应符合规定。
样品测定：精密量取供试品溶液及对照品溶液各30μL，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
3 方法学研究
3.1 专属性试验
取空白辅料片20片，研细，称取粉末40mg，置50mL量瓶中，按供试品溶液配制，作为空白辅料溶剂；以溶剂[冰醋酸-乙腈-水（0.1∶60∶40）]为空白溶剂；精密量取空白溶剂、空白辅料溶剂及样品配制项下的系统适用性试验溶液、供试品溶液、对照品溶液各30μL，注入色谱仪，记录图谱。结果显示，系统适用性试验溶液的主峰塔板数为7462（>2000），与相对保留时间1.13的色谱峰分离度为2.86（R>1.5），系统适用性符合要求；空白辅料溶液在供试品、对照品溶液的主峰位置无干扰峰，即辅料对含量测定无干扰。
3.2 线性与范围
以进样浓度为横坐标，依折麦布峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果显示，依折麦布在40.23～402.30μg/mL的浓度范围内与其峰响应值呈线性关系，线性方程为Y=72 468.905 69X+151.970 21，相关系数为r=0.99 998。
3.3 准确度
结果显示，依折麦布的含量测定加样回收率均在98%～102%，平均回收率为98.8%，RSD为0.3%（RSD≤2.0%）符合要求，说明该方法具有良好的准确度。
3.4 精密度
量取2.2项下的对照品溶液30μL，注入色谱仪，连续进样6次，测定峰面积，结果见表3。结果显示，各峰面积的RSD为0.03%（RSD≤2.0%），该含量测定方法的精密度良好。
3.5 重复性
3.6 溶液稳定性
取2.2项下的供试品溶液1份，分别于配样后1h、2h、4h、8h、12h、24h进样，测定峰面积，结果见表5。结果表明样品溶液至少在24h内稳定（RSD≤2.0%）。
3.7 耐用性试验
取2.2项下系统适用性试验溶液1份，分别对色谱条件中的流动相比例、流速、柱温、色谱柱品牌进行变动，从主峰的保留时间、塔板数、拖尾因子、分离度来考察该方法的耐用性，结果见表6。
从表格数据可以看出，改变流动相比例、流速、柱温、色谱柱品牌，系统适用性均符合要求，对含量测定影响不大，该方法耐用性良好。
4 讨论
4.1 检测波长的选择
取对照平溶液在200～400nm波长范围内进行光谱扫描，结果在最大吸收波长为232nm，且在此波长下空白辅料无干扰，故选择232nm作为依折麦布的检测波长。 4.2 溶剂的选择
依折麦布不溶于水，但可溶于乙腈，在反相体系中，为了避免产生溶剂化效应，经过试验，选择比例为60∶40的乙腈-水溶液，添加0.1%的冰醋酸可以促进依折麦布的溶解，故选择冰醋酸-乙腈-水（0.1∶60∶40）作为溶剂[11-14]。
4.3 结论
本方法测定结果准确，精密度高，耐用性良好，可以作为依折麦布的含量测定方法。
[参考文献]
[1] 邱思婕.高效液相法测定依折麦布片的含量[J].广州化工，2012，40（16）：134-135.
[2] 徐艳玲，张静，周琳.调脂药物—依折麦布的研究进展[J].中国循证心血管医学杂志，2012，4（4）：168-169.
[3] 陈怡粤，杨俊芬，周炯峰，等.依折麦布降低血浆低密度脂蛋白胆固醇的疗效分析[J].华夏医学，2009，22（3）：424-426.
[4] 中国老年学学会心脑血管病专业委员会等.选择性胆固醇吸收抑制剂临床应用中国专家共识（2011版）[J].中国心血管病研究，2011（8）：561-566.
[5] 李云建.胆固醇吸收抑制剂——依折麦布[J].医学理论与实践，2012，25（11）：1304-1305.
[6] 熊桢，翟所迪，陈凤荣.新型血脂调节药——依折麦布[J].中国新药与临床杂志，2007，26（11）：864-868.
[7] 国家药典委员会.中国药典·二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：389-391.
[8] 吕荣.依折麦布对高脂血症并肝损患者的疗效和安全性观察[J].中国现代医生，2011，49（21）：76-79.
[9] Bays H，Sapres A，Taggart IW.Long-term （48-week）safety of ezetimibe 10mg/day coadministered with simvastatin compared to simvastatin alone in patientq with primm7 hypercholesterolemia[J].Curr Med Res Opin，2008，24（10）：2953-2966.
[10] Masana L，Mata P，Gagne C.L0ng—term safety and，tolerability pro—files andlipid—modifying eficacy of ezetinfibe coadministered with ongoing simvastatin treatment：A multicenter，randomized，double。blind.placebo.controlled，48-Week extension study[J].Clin Ther，2005，27（2）：174-184.
[11] ICH Q2A.Test on Validation of Analytical Procedures.1996.
[12] ICH Q2B.Validation of Analytical Procedures：Methodology，1996.
[13] 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则[S]. 2005：3.
[14] FDA.Guidance for Industry：analytical procedures and methods validation，chemistry，manufacturing， and controls documentation（Draft），2000，8.
（收稿日期：2014-03-27）
[关键词] 依折麦布；含量测定；高效液相色谱法
[中图分类号] R914 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）12-108-04
依折麦布（Ezetimibe）是胆固醇吸收抑制剂，主要降低低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的血浆浓度[1-3]，阻断胆固醇外源性吸收途径，适用于治疗原发性高胆固醇血症[4-5]，纯合子家族性高胆固醇血症（HoFH）和纯合子谷甾醇血症（或植物甾醇血症），疗效较好，安全性也较好[6]。本研究建立了HPLC含量测定方法，为依折麦布的进一步研究提供了可靠的分析方法和理论依据。
1 试药与仪器
1.1 试药
依折麦布对照品，来源于印度TEVA，依折麦布片及空白辅料片，由扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司提供；乙腈（色谱纯）、氢氧化钠（分析纯）、四氢呋喃（色谱纯）、盐酸（分析纯）、冰醋酸（分析纯）、磷酸二氢钾（分析纯）。
1.2 仪器
Agilent 1260型高效液相色谱仪，Agilent 1260DAD紫外吸收检测器，XS 205电子天平。
2 含量测定方法
2.1 色谱条件
照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD[7]），以Agilent SB-C18（5μm，150mm×4.6mm）为色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-四氢呋喃（65∶25∶10）为流动相；检测波长为232nm，柱温为25℃，流速为1.0mL/min。
2.2 样品配制
系统适用性试验溶液：称取依折麦布对照品20mg，置100mL两瓶中，加0.01mol/L乙醇制氢氧化钠溶液10mL使溶解，密塞，于55℃加热15min，取出，立即加0.1mol/L盐酸溶液2mL及溶剂[冰醋酸-乙腈-水（0.1∶60∶40），下同]适量，放冷，用溶剂定容，摇匀，作为系统适用性试验溶液[8-9]。
供试品溶液：取本品20片，研细，取粉末适量（约相当于依折麦布10mg），精密称定，置50mL量瓶中，加溶剂适量，超声30min，振摇45min，用溶剂定容，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
对照品溶液：取依折麦布对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释成浓度为0.2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。
2.3 含量测定
系统适用性试验：照高效液相色谱法[10]，精密量取系统适用性试验溶液30μL，注入色谱仪，记录色谱图，主峰相对保留时间为1.13的色谱峰，与主峰的分离度应符合规定。
样品测定：精密量取供试品溶液及对照品溶液各30μL，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
3 方法学研究
3.1 专属性试验
取空白辅料片20片，研细，称取粉末40mg，置50mL量瓶中，按供试品溶液配制，作为空白辅料溶剂；以溶剂[冰醋酸-乙腈-水（0.1∶60∶40）]为空白溶剂；精密量取空白溶剂、空白辅料溶剂及样品配制项下的系统适用性试验溶液、供试品溶液、对照品溶液各30μL，注入色谱仪，记录图谱。结果显示，系统适用性试验溶液的主峰塔板数为7462（>2000），与相对保留时间1.13的色谱峰分离度为2.86（R>1.5），系统适用性符合要求；空白辅料溶液在供试品、对照品溶液的主峰位置无干扰峰，即辅料对含量测定无干扰。
3.2 线性与范围
以进样浓度为横坐标，依折麦布峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果显示，依折麦布在40.23～402.30μg/mL的浓度范围内与其峰响应值呈线性关系，线性方程为Y=72 468.905 69X+151.970 21，相关系数为r=0.99 998。
3.3 准确度
结果显示，依折麦布的含量测定加样回收率均在98%～102%，平均回收率为98.8%，RSD为0.3%（RSD≤2.0%）符合要求，说明该方法具有良好的准确度。
3.4 精密度
量取2.2项下的对照品溶液30μL，注入色谱仪，连续进样6次，测定峰面积，结果见表3。结果显示，各峰面积的RSD为0.03%（RSD≤2.0%），该含量测定方法的精密度良好。
3.5 重复性
3.6 溶液稳定性
取2.2项下的供试品溶液1份，分别于配样后1h、2h、4h、8h、12h、24h进样，测定峰面积，结果见表5。结果表明样品溶液至少在24h内稳定（RSD≤2.0%）。
3.7 耐用性试验
取2.2项下系统适用性试验溶液1份，分别对色谱条件中的流动相比例、流速、柱温、色谱柱品牌进行变动，从主峰的保留时间、塔板数、拖尾因子、分离度来考察该方法的耐用性，结果见表6。
从表格数据可以看出，改变流动相比例、流速、柱温、色谱柱品牌，系统适用性均符合要求，对含量测定影响不大，该方法耐用性良好。
4 讨论
4.1 检测波长的选择
取对照平溶液在200～400nm波长范围内进行光谱扫描，结果在最大吸收波长为232nm，且在此波长下空白辅料无干扰，故选择232nm作为依折麦布的检测波长。 4.2 溶剂的选择
依折麦布不溶于水，但可溶于乙腈，在反相体系中，为了避免产生溶剂化效应，经过试验，选择比例为60∶40的乙腈-水溶液，添加0.1%的冰醋酸可以促进依折麦布的溶解，故选择冰醋酸-乙腈-水（0.1∶60∶40）作为溶剂[11-14]。
4.3 结论
本方法测定结果准确，精密度高，耐用性良好，可以作为依折麦布的含量测定方法。
[参考文献]
[1] 邱思婕.高效液相法测定依折麦布片的含量[J].广州化工，2012，40（16）：134-135.
[2] 徐艳玲，张静，周琳.调脂药物—依折麦布的研究进展[J].中国循证心血管医学杂志，2012，4（4）：168-169.
[3] 陈怡粤，杨俊芬，周炯峰，等.依折麦布降低血浆低密度脂蛋白胆固醇的疗效分析[J].华夏医学，2009，22（3）：424-426.
[4] 中国老年学学会心脑血管病专业委员会等.选择性胆固醇吸收抑制剂临床应用中国专家共识（2011版）[J].中国心血管病研究，2011（8）：561-566.
[5] 李云建.胆固醇吸收抑制剂——依折麦布[J].医学理论与实践，2012，25（11）：1304-1305.
[6] 熊桢，翟所迪，陈凤荣.新型血脂调节药——依折麦布[J].中国新药与临床杂志，2007，26（11）：864-868.
[7] 国家药典委员会.中国药典·二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：389-391.
[8] 吕荣.依折麦布对高脂血症并肝损患者的疗效和安全性观察[J].中国现代医生，2011，49（21）：76-79.
[9] Bays H，Sapres A，Taggart IW.Long-term （48-week）safety of ezetimibe 10mg/day coadministered with simvastatin compared to simvastatin alone in patientq with primm7 hypercholesterolemia[J].Curr Med Res Opin，2008，24（10）：2953-2966.
[10] Masana L，Mata P，Gagne C.L0ng—term safety and，tolerability pro—files andlipid—modifying eficacy of ezetinfibe coadministered with ongoing simvastatin treatment：A multicenter，randomized，double。blind.placebo.controlled，48-Week extension study[J].Clin Ther，2005，27（2）：174-184.
[11] ICH Q2A.Test on Validation of Analytical Procedures.1996.
[12] ICH Q2B.Validation of Analytical Procedures：Methodology，1996.
[13] 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则[S]. 2005：3.
[14] FDA.Guidance for Industry：analytical procedures and methods validation，chemistry，manufacturing， and controls documentation（Draft），2000，8.
（收稿日期：2014-03-27）