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为获得转基因克隆牛的供体细胞，采用组织块贴附培养的方法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞，经2～3次传代纯化，绘制生长曲线，分别分析体外传代培养10代以内和20代以上细胞的核型特征。分别采用800、900、1000V／cm和1、5、10、15和20ms的参数组合，将线性化的带有新霉素抗性和绿色荧光蛋白双重筛选标记的人胰岛素原乳腺特异表达载体pNEI电穿孔转入体外培养的牛胎儿成纤维细胞，经800μg／mLG418筛选2周，继续以300μg／mLG418扩大培养2～3代，取部分筛选后的细胞进行PCR检测结果表明，体