【摘 要】
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目的 研究急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞MLL-AF9融合基因沉默对p27表达及转录调控的影响.方法 选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并俣成MLL-AF9小干扰RN
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所
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目的 研究急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞MLL-AF9融合基因沉默对p27表达及转录调控的影响.方法 选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并俣成MLL-AF9小干扰RNA(siRNA)片段.应用脂质体转染.方法 将MLL-AF9 siRNA导入细胞,通过流式细胞术检测siRNA转染效率,用RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blot检测MLL-AF9蛋白水平沉默效果,比较细胞周期抑制蛋白p27表达变化,利用染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)技术研究MLL-AF9融合蛋白是否与p27启动子结合.结果 转染MLL-AF9siRNA后THP-1细胞MLL-AF9 mRNA相对表达水平(0.31±0.07)较对照组(1.25±0.13)明显受抑(P＜0.01),p27 mRNA表达水平(0.84±0.12)较对照组(0.35±0.03)明显上调(P＜0.01),应用ChIP结合PCR扩增的.方法 分析发现MLL-AF9融合蛋白可与THP-1细胞p27基因启动子区域的DNA片段结合.结论 MLL-AF9融合基因沉默后可使p27表达上调,其机制可能为MLL-AF9基因沉默解除了MLL-AF9融合蛋白与p27启动子的结合,从而恢复p27基因的表达.
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