锝标突触结合蛋白ⅠC2A片段探测肺癌凋亡的实验研究

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目的 探讨锝标突触结合蛋白Ⅰ C2A片段(99mTc-C2A)探测非小细胞肺癌(NSCLC)化疗后,肿瘤细胞凋亡的情况.方法 采用2-IT修饰后配体交换法标记合成99mTc-C2A.H460 NSCLC肿瘤裸鼠25只,以25 mg/kg紫杉醇化疗诱导,分成治疗前、化疗诱导后12、24、48、72 h共5组,99mTcC2A显像探测化疗前后各组肿瘤组织细胞凋亡,勾画感兴趣区,计算肿瘤与对侧正常组织放射性比值(T/NT).显像结束后,即刻断颈处死,取出肿瘤及各脏器,测定每克组织百分注射剂量率(%ID/g).瘤体分成两部分,一部分通过流式细胞术测定肿瘤组织活化半胱氨酸天冬蛋白水解酶(caspase-3),另一部分通过光镜HE及TUNEL染色测定凋亡指数.结果 99mTc-C2A显像显示,治疗前肿瘤有少量放射性摄取,肿瘤摄取为(1.21±0.51)%ID/g;化疗诱导后肿瘤摄取(%ID/g)明显增加,12、24、48 h肿瘤摄取分别为2.82±0.90、3.13±0.48和3.52±1.18.治疗前肿瘤T/NT为1.48±0.23;12、24、48 h T/NT分别为1.79±0.34、2.23±0.33和2.78±0.34,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05).未化疗组活化caspase-3为2.33±0.63%;紫杉醇化疗后,大量caspase-3被激活,12、24、48 h分别为(10.03±2.15)%、(33.80±5.04)%和(57.80±11.29)%.光镜HE及TUNEL染色法显示,未化疗组有散在细胞发生凋亡,化疗诱导后12、24、48、72 h大批细胞发生凋亡,12、24、48 h每个高倍视野中的凋亡细胞数分别为(8.25±2.27)%、(34.43±4.73)%和(71.88±11.88)%.肿瘤摄取同活化caspase-3及凋亡细胞数有很好的相关性.结论 99mTc-C2A显像可早期探测实体肿瘤化疗后凋亡,并和活化caspase-3及凋亡指数呈直线相关.C2A有望成为探测细胞凋亡的分子探针,进而早期预测和评价肿瘤疗效.
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