【摘 要】
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目的 探究miRNA-200b对肝细胞癌索拉菲尼耐药的影响,以期延缓或改善晚期肝癌患者对索拉菲尼的耐药,增加索拉菲尼的疗效.方法 通过逐步提高培养基中索拉菲尼浓度的方法建立索拉菲尼耐药的肝细胞癌HepG2-SR细胞系,并通过实时荧光定量(RT-PCR)法检测HepG2-SR细胞系和其母本HepG2细胞系中miRNA-200b的表达差异,同时检测HepG2-SR细胞转染miRNA-200b mimics后miRNA-200b表达的变化;CCK-8法检测转染后HepG2-SR细胞对索拉菲尼敏感度的改变;划痕实
【机 构】
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400038重庆,陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院肝胆外科
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目的 探究miRNA-200b对肝细胞癌索拉菲尼耐药的影响,以期延缓或改善晚期肝癌患者对索拉菲尼的耐药,增加索拉菲尼的疗效.方法 通过逐步提高培养基中索拉菲尼浓度的方法建立索拉菲尼耐药的肝细胞癌HepG2-SR细胞系,并通过实时荧光定量(RT-PCR)法检测HepG2-SR细胞系和其母本HepG2细胞系中miRNA-200b的表达差异,同时检测HepG2-SR细胞转染miRNA-200b mimics后miRNA-200b表达的变化;CCK-8法检测转染后HepG2-SR细胞对索拉菲尼敏感度的改变;划痕实验和transwell实验检测转染前后HepG2-SR细胞迁移和侵袭能力的改变;流式细胞仪检测转染前后HepG2-SR细胞凋亡情况;Western-blot检测转染前后上皮间质转变(epithelial mesenchymal transition,EMT)标志物的改变.结果 耐药株HepG2-SR细胞对索拉菲尼的耐药性显著高于其母本株HepG2,miRNA-200b的表达显著低于其母本株HepG2;HepG2-SR细胞转染miRNA-200b mimics后miRNA-200b表达显著升高,索拉菲尼半抑制浓度(IC50)显著降低,细胞迁移率显著降低,细胞侵袭能力显著降低,细胞凋亡显著增加,上皮细胞标志E-Cadherin表达增加,间质细胞标志N-Cadherin、Vimentin表达减弱.结论 miRNA-200b抑制HepG2-SR细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,促进细胞凋亡,从而逆转索拉菲尼耐药性.
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