【摘 要】
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目的 cyclin D1基因在细胞周期调控中起关键性作用.研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关;并且与肿瘤细胞对化疗药物的抗拒性有关.抑制cyclin D1蛋白表达可达到化疗增敏作用.研究目的在于利用RNA干扰(RNAi)技术体外观测其对K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及其增强多柔比星(ADM)对K562细胞毒性的作用.方法 体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA
【机 构】
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223300江苏淮安,南京医科大学附属淮安一院肿瘤内科,223300江苏淮安,南京医科大学附属淮安一院肿瘤内科,223300江苏淮安,南京医科大学附属淮安一院肿瘤内科,中山大学肿瘤防治中心内科
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目的 cyclin D1基因在细胞周期调控中起关键性作用.研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关;并且与肿瘤细胞对化疗药物的抗拒性有关.抑制cyclin D1蛋白表达可达到化疗增敏作用.研究目的在于利用RNA干扰(RNAi)技术体外观测其对K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及其增强多柔比星(ADM)对K562细胞毒性的作用.方法 体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western Blotting分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化,流式细胞术检测细胞周期分布及对凋亡率的影响,MTF法检测K562细胞对ADM敏感性的变化.结果 构建了靶向cyclin D1基因的shRNA表达质粒(pshRNA-419和pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制cyclin D1基因表达;影响K562细胞周期分布,诱导细胞凋亡.并降低ADM半数抑制浓度,提高了化疗敏感性.而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应.结论 沉默K562细胞cyclin D1基因表达可达到有效的化疗增敏目的。
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