【摘 要】
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目的 通过建立汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测汉坦病毒. 方法 根据汉滩型和汉城型汉坦病S片段基因的序列分别设计特异性探针引物,使用含有目的基因片段的重
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,江苏南京210002
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目的 通过建立汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测汉坦病毒. 方法 根据汉滩型和汉城型汉坦病S片段基因的序列分别设计特异性探针引物,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立检测两型汉坦病毒的实时荧光定量PCR方法. 结果 建立的检测方法特异性良好,与其他常见病原不发生交叉反应;最低检测限为101 copies/μl,灵敏度高;不同梯度定量模板的拷贝数的对数值与Ct值之间线性关系表达式分别为y=-3.4607x+40.988(HTN),y=-3.5307x+39.356(SEO),扩增效率分别为92.2％(HTN)和92.6％(SEO),相关系数R2分别为0.9968(HTN)和0.9997(SEO),呈良好的线性关系,且重复性好. 结论 建立的实时荧光定量PCR灵敏度高,重复性好,可用于汉坦病毒的快速检测,并可初步辨别汉滩型和汉城型汉坦病毒,对肾综合征出血热的病原早期诊断和流行病学调查有较好的应用价值.
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