【摘 要】
:
基因捕获技术是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因,它是继自然突变
【机 构】
:
中国科学院遗传与发育生物学研究所; 中国科学院遗传与发育生物学研究所 北京 100080; 北京 100080;
【基金项目】
:
This work was supported by the National Key Basic Research Project (No. G2000016109) Beijing Natural Science Foundation Program(No. 5021002).
论文部分内容阅读
基因捕获技术是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因,它是继自然突变、物理突变和化学突变之后发展起来的新的分子生物学方法。基因捕获载体是带有报告基因和/或选择标记基因的不完整的基因表达载体;这些载体所带的基因只有在整合到宿主功能基因内部且与融合的宿主基因编码框一致时才能得以表达。经典的基因捕获载体有:增强子捕获载体、基因捕获载体和启动子捕获载体。增强子载体只有一个最小化的启动子控制下游报告基因的表达活性。只有当启动子上游存在一个增强子时才能启动其下游基因的转录;而单独依靠这个启动子则不能转录。狭义的基因捕获载体是指插入到结构基因内部从而捕获该基因的载体,分为内含子捕获载体和外显子捕获载体。前者插入内含子,因此需要在无启动子的报告基因前面添加一个splice acceptor(SA)位点;后者插入外显子,因此不需SA位点就能产生融合蛋白mRNA。启动子捕获载体由一个无启动子的报告基因和选择标记基因组成,只有在捕获载体插入到内源基因的外显子中,且两阅读框一致的时候才会有报告基因和被捕获的内源基因上游编码区的融合蛋白的表达。利用某些遗传元件的遗传特性也可以构建非常有用的捕获载体。常用的有:逆转录病毒介导的捕获载体和转座子介导的捕获载体等等。该文较为全面地概括了转座子介导的捕获载体的用途和研究现状。比如:在拟南芥中应用Ac/Ds转座子元件,在果蝇中应用P-element和piggyBac转座元件,在斑马鱼中应用Tol2转座子元件,在脊椎动物研究中应用Tcl/meriner转座子超家族,以及在哺乳动物和小鼠ES细胞中应用piggyBac 转座子元件。还列举了设计新颖的载体优化策略,比如:发展新的选择标记基因,利用内源核糖体识别/结合位点(IRES), 去掉起始密码子和加一小段接头(linker)等方法。最后介绍了几种针对特定实验目的而设计的捕获载体。附录部分还列出了关于基因捕获技术的网络资源。
其他文献
<正>脑卒中患者由于神经系统受损,失去生活自理能力,食物残渣易存留于瘫侧齿颊之间,致使口腔内细菌寄居、繁殖,合并吞咽障碍、鼻饲饮食者,极易发生口腔炎症、溃疡及口臭等[1]
试论《阿Q正传》的典型化方法顾德梅,朱耀国《阿Q正传》是鲁迅小说的代表作。它是作者对“沉默的国民”作长期探究的艺术结晶,也是鲁迅改造“国民性”思想的集中体现。《阿Q正传》
织构广泛存在于铝合金制品中,并影响着材料的一系列性能,包括强度、延展性、成形性和腐蚀性等。介绍了目前织构的一般测试分析方法,主要阐述了铝合金制造加工过程中产生的各
炎性衰老是衰老研究领域的一个新成员,是指衰老机体随增龄出现的长期慢性促炎症反应进行性升高的状态.炎性衰老与多种老年相关疾病如阿尔兹海默症、心血管疾病、帕金森病、动
先秦是中国古代史学的发端时期。从远古神话传说的出现,到甲骨金文的记事、各种史籍的产生,以至春秋战国多种历史撰述的问世,史学的一些主要方面都已形成并得到初步发展。在
随着社会的发展,我国对管理会计工作的重视程度日益提高,而建设工作的力度正在逐渐加大。2015年政府会议中,我国总理指出,在管理会计体系中,强化清单管理工作的意义重大,不仅
理清学术界针对"问题与主义"之争在不同历史阶段赋予的涵义,解读"问题与主义"文本原意,即其历史语境,并在"问题与主义"的历史语境中探析我国改革开放历程中遇到的"问题与主义
近年来,由于视网膜图像具有广泛的应用场景,视网膜图像分割越发受到学者们的关注和研究。视网膜本身非常稳定且不易磨损和退化,临床上,医生可以通过收集患者的眼底图像来诊断
Pickering乳化剂广泛应用于食品、医药、采油、造纸等领域,与传统乳化剂相比,具有性能优越、环境友好、适用面广等优点,但也存在传统乳化剂的表面活性不可调控的问题。因此,
<正>近年来,随着剖宫产率的增高,剖宫产的各种并发症也随之增加,术后腹部切口的脂肪液化有逐年增多的趋势,给患者及家属带来了精神和经济的负担,给医院工作带来了负面的影响