论文部分内容阅读
摘 要：为探讨宁乡猪遗传多样性，本研究以外来猪种大白猪为对照，研究了宁乡猪GLP2R基因的多态性。通过限制性片段长度多态性聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP）分析检测了该基因A/G位点。结果表明，宁乡猪全部为GG型，大围子猪和黔邵花猪的优势等位基因都为G；而外来品种（大白猪）的优势等位基因为A，其基因频率为0.6433，中外品种的差异较大。本研究为宁乡猪的保种和选育提供了有益的资料。
关键词：猪；GLP2R基因；遗传多态性
宁乡猪是我国著名的四大地方猪品种之一，原产于湖南省宁乡县的流沙河及草冲一带，其特征是“丝颈葫芦肚，耳薄嘴筒齐，稀毛现薄皮，鱼尾后脚直，奶子一斩齐，四脚要撒蹄”、“乌云盖雪银颈圈”。其体型中等，体质疏松细致，体躯呈圆筒状，毛色为黑白花，四肢、肋腹及颈下部为白色，头和臀部呈黑色。GLP2R属于G蛋白偶联受体家族[1]。GLP2R为GLP2的特异性受体，GLP2与其受体结合从而发挥作 用[2-3]。Luo等[4]认为GLP2R基因与猪肌内脂肪含量有关。
本研究首次检测了宁乡猪GLP2R基因的多态性，旨在为揭示猪GLP2R基因的分子遗传机制奠定基础，并为宁乡猪保种和选育提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 样品采集
以4个地方猪种（大围子猪、宁乡猪、沙子岭猪、黔邵花猪）和1个外来猪种（大白猪）为试验材料，共计523头，分别采取猪耳组织样品，于-20 ℃保存。
1.2 基因组DNA提取
基因组DNA提取按常规酚-氯仿法进行。
1.3 引物合成及聚合酶链反应扩增
用Primer Premier 5.0软件设计引物，其中正向引物：5’-ATG AGG CCG GAA CGG AGC CG-3’；反向引物：5’-CTA ATC TCA CTC TCC TCG AG-3’，由华大基因公司合成。聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）体系：2×PCR Master·Mix 10 μL，双蒸水8.0 μL，引物1.0 μL，基因组DNA 1.0 μL。PCR扩增程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s；55 ℃复性30 s；72 ℃延伸30 s，共35个循环；72 ℃延伸 5 min；4℃保存。
2 结果与分析
2.1 基因型分型
在扩增的746 bp的片段中，709 bp处A/G突变位点导致了限制性内切酶BstE Ⅱ的变化。GLP2R基因的A/G位点存在3种基因型，分别为GG基因型（506 bp、240 bp）、AG基因型（746 bp、506 bp、240 bp）和AA基因型 （746 bp）（图1）。
2.2 猪GLP2R基因的多态性分析
GLP2R基因A/G突变位点PCR-RFLP-BstEⅡ的基因和基因型频率见表1。大围子猪和黔邵花猪这两个地方品种的优势等位基因都为G；而外来品种（大白猪）的优势等位基因为A，基因频率为0.6433。从基因型分布频率看，GG型占优势，AA型个体较少，只在沙子岭猪中发现1个，在黔邵花猪中发现4个，在桃源黑猪中检出15个；但大白猪中GG型较少（41个），而AA型和AG型分别有125个和127个。
3 讨论与结论
宁乡猪GLP2R基因A/G位点基因型全部为GG型，可能的原因是该品种经过长期高度近交的人工選育，此位点已全部纯合，这也反映了该品种比较纯。大围子猪在该位点也是全部为GG型。沙子岭猪和黔邵花猪G等位基因为优势等位基因，而在外来品种（大白猪）中A等位基因为优势等位基因，这也反映了中外品种的遗传背景差异大。在该位点上的差异有望作为品种标记的一种手段，应用于标记辅助选择。□□
参考文献：（4篇，略）
关键词：猪；GLP2R基因；遗传多态性
宁乡猪是我国著名的四大地方猪品种之一，原产于湖南省宁乡县的流沙河及草冲一带，其特征是“丝颈葫芦肚，耳薄嘴筒齐，稀毛现薄皮，鱼尾后脚直，奶子一斩齐，四脚要撒蹄”、“乌云盖雪银颈圈”。其体型中等，体质疏松细致，体躯呈圆筒状，毛色为黑白花，四肢、肋腹及颈下部为白色，头和臀部呈黑色。GLP2R属于G蛋白偶联受体家族[1]。GLP2R为GLP2的特异性受体，GLP2与其受体结合从而发挥作 用[2-3]。Luo等[4]认为GLP2R基因与猪肌内脂肪含量有关。
本研究首次检测了宁乡猪GLP2R基因的多态性，旨在为揭示猪GLP2R基因的分子遗传机制奠定基础，并为宁乡猪保种和选育提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 样品采集
以4个地方猪种（大围子猪、宁乡猪、沙子岭猪、黔邵花猪）和1个外来猪种（大白猪）为试验材料，共计523头，分别采取猪耳组织样品，于-20 ℃保存。
1.2 基因组DNA提取
基因组DNA提取按常规酚-氯仿法进行。
1.3 引物合成及聚合酶链反应扩增
用Primer Premier 5.0软件设计引物，其中正向引物：5’-ATG AGG CCG GAA CGG AGC CG-3’；反向引物：5’-CTA ATC TCA CTC TCC TCG AG-3’，由华大基因公司合成。聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）体系：2×PCR Master·Mix 10 μL，双蒸水8.0 μL，引物1.0 μL，基因组DNA 1.0 μL。PCR扩增程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s；55 ℃复性30 s；72 ℃延伸30 s，共35个循环；72 ℃延伸 5 min；4℃保存。
2 结果与分析
2.1 基因型分型
在扩增的746 bp的片段中，709 bp处A/G突变位点导致了限制性内切酶BstE Ⅱ的变化。GLP2R基因的A/G位点存在3种基因型，分别为GG基因型（506 bp、240 bp）、AG基因型（746 bp、506 bp、240 bp）和AA基因型 （746 bp）（图1）。
2.2 猪GLP2R基因的多态性分析
GLP2R基因A/G突变位点PCR-RFLP-BstEⅡ的基因和基因型频率见表1。大围子猪和黔邵花猪这两个地方品种的优势等位基因都为G；而外来品种（大白猪）的优势等位基因为A，基因频率为0.6433。从基因型分布频率看，GG型占优势，AA型个体较少，只在沙子岭猪中发现1个，在黔邵花猪中发现4个，在桃源黑猪中检出15个；但大白猪中GG型较少（41个），而AA型和AG型分别有125个和127个。
3 讨论与结论
宁乡猪GLP2R基因A/G位点基因型全部为GG型，可能的原因是该品种经过长期高度近交的人工選育，此位点已全部纯合，这也反映了该品种比较纯。大围子猪在该位点也是全部为GG型。沙子岭猪和黔邵花猪G等位基因为优势等位基因，而在外来品种（大白猪）中A等位基因为优势等位基因，这也反映了中外品种的遗传背景差异大。在该位点上的差异有望作为品种标记的一种手段，应用于标记辅助选择。□□
参考文献：（4篇，略）