【摘 要】
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目的构建抗CD44抗体的单链抗体(anti-CD44-ScFv),为进一步应用基因工程抗体研究打下基础.方法从分泌抗CD44单克隆抗体的杂交瘤细胞系HII44a中提取总RNA,经RT-PCR分离获得了轻
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目的构建抗CD44抗体的单链抗体(anti-CD44-ScFv),为进一步应用基因工程抗体研究打下基础.方法从分泌抗CD44单克隆抗体的杂交瘤细胞系HII44a中提取总RNA,经RT-PCR分离获得了轻、重链可变区(VL、VH)基因,用连接肽将其构建成具有VL-Linker-VH结构的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到分泌型蛋白表达载体PET22b(+)中进行表达.结果经测序表明,VH、VL及Linker的序列正确.ScFv在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的16%.能够特异性与CD44抗原结合.结论成功构建抗CD44抗体单链抗体,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础.
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