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摘要：目的采用正交试验法优选桑芪首乌片的提取工艺。方法钩藤用乙醇超生提取，以乙醇浓度，提取时间，液料比为三因素L9（33），干膏得率为指标，优选钩藤最佳提取工艺；剩余药味与钩藤药渣一并进行水煎煮，以液料比、煎煮次数、煎煮时间为三因素L9（33），总黄酮含量和干膏得率为指标，优选最佳提取工艺。结果该处方提取最佳工艺条件为：6倍量60%的乙醇超声提取钩藤60 min，药渣与其余药味用8倍量水，提取2次，每次1 h。结论该工艺操作简便易行，适用于桑芪首乌片的提取。
关键词：桑芪首乌片；提取工艺；钩藤超声提取；总黄酮UV测定
中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2015）06-0086-03
云南省荣誉名中医陆家龙主任医师潜心研究的经验方“桑芪首乌汤”以中医基础理论为依据，主要由桑寄生、黄芪、制首乌、钩藤、天麻、三七须根等十余味天然药物组成。在中医治疗高血压及相关心脑血管疾病时，对于改善患者临床症状及提高生活质量方面是具有较好的疗效。西医对于控制高血压有很多类药物，但其症状改善效果并不尽人意，部分血压虽已控制正常但上述症状仍然持续存在，且大部分药物价格昂贵，长期服用病人负担过重，甚至存在或这或那的副反应。该处方经过了二十余年的临床观察，具有改善症状快、疗效持续平稳，安全、价低等优点，倍受广大患者的认可。现将原有汤剂改为片，以便于患者携带、服用。本实验为片剂提取工艺的研究，为该剂型进一步研究奠定基础。
1仪器和试药
1.1仪器BJ-II崩解时限仪，SHB-III 循环水式多用真空表，电热恒温水浴锅，FN202-2A型 电热干燥箱，KS-3000ULTRASSONIC CLEANER.
1.2试药药品购于云南白药集团股份有限公司中药饮片分公司
2提取
2.1钩藤的提取根据文献[1～2]，钩藤属茜草科植物，为中医传统临床中草药，其性凉，味甘苦，具有清热平肝，息风定惊的功效，临床用于高血压病头晕等。中医学理论中明确提及“钩藤后下”，现代药学研究表明钩藤中所含有效成分钩藤碱，异钩藤碱等受热易破坏，所以在提取过程中，应控制其温度不高于81℃[3]。因此，我们以乙醇浓度，提取时间，液料比为三因素L9（33），干膏得率为指标，优选钩藤超声提取的最佳工艺。因素水平表见表1。
从3个因素的极差来看，影响提取效果的因素顺序A>B>C，即醇浓度是影响最大的因素，其次为提取时间，液料比的影响最小。正交试验结果显示，最佳的提取工艺条件是6倍量60%的乙醇，提取时间为 1 h。
2.2其余药材的提取
2.2.1正交设计有文献报道[4]首乌的乙醇提取物具有肝细胞毒性，且其余药味的有效成分多为皂苷、黄酮等水溶性物质，同时，考虑到乙醇提取在今后大规模生产中对设备等硬件设施的高要求，将剩余药味与钩藤药渣一并进行水煎煮，以液料比、煎煮次数、煎煮时间为三因素L9（33），总黄酮含量和干膏得率为指标，优选最佳提取工艺。因素水平表见表3。
2.2.2总黄酮含量测定（UV法）
2.2.2.1仪器与试药仪器：UV-7502PC（上海尖锐光电科技有限公司）；对照品：芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号为：100080–201309）；供试品：桑芪首乌片干膏，昆明市中医医院提供；试剂：蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2.2.2.2对照品溶液的制备精密称取经 108 ℃ 干燥至恒重的芦丁对照品约10.7 mg，用甲醇溶解，转移入 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，得芦丁对照品溶液浓度为0.107 mg/mL，备用。
2.2.2.3供试品溶液的制备取干膏5 g研细，加入 25 mL甲醇称重，超声30 min，补足重量，过滤，滤液挥干后用水溶解至10 mL，取用等体积乙酸乙酯萃取4次后，回收乙酸乙酯的残渣用甲醇定容至25 mL容量瓶中，即得供试品溶液。
2.2.2.4测定方法量取1 mL供试品溶液置25 mL量瓶中，加5% NaNO2溶液1mL，混匀，放置6 min，加10% Al（NO3）3溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4%NaOH溶液10 mL，放置15 min，甲醇稀释至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白，在500 nm处测定吸光度。连续测定3次，取平均值，以芦丁为对照品，采用标准曲线法测定总黄酮含量。
从3个因素的极差来看，影响提取效果的因素顺序A>B>C，即提取次数是影响最大的因素，其次为提取时间，液料比的影响最小。就A因素来说，2，3水平对结果的影响较为接近，且明显优于1水平；出于降低成本考虑，我们选择了较为经济的工艺，即：8倍量水，提取2次，每次1 h。
3结果与讨论
3.1根据实验结果得到钩藤超声提取的最佳的提取工艺条件是6倍量60%的乙醇，提取 1 h；钩藤醇提后的药渣与其余药味一并用8倍量水，提取2次，每次1 h。该工艺操作简便易行，适用于桑芪首乌片的提取。
3.2根据处方药味组成，方中天麻及钩藤为中药降压之药对，而钩藤中的主要活性成分为钩藤碱和异钩藤碱，但是此类生物碱遇热容易改变。而传统的水煎煮涉及较多高温环节，对其药效影响明显。根据文献报道以乙醇提取为主，但醇提的大生产对设备和环境的限制颇多；也有文献[5]采用超声提取加酵解的方法对钩藤中活性成分提取，得率较高。因此，结合实际，对钩藤采用了超声提取的方法。由于（异）钩藤碱的标准品（含量测定用）无法从中国生物制品检定所购得。基于其热敏性特点，我们在严格控制提取温度的前提下对其收膏率进行量化，在一定程度上极大的保证了其药效学的物质基础。
3.3基于原处方为汤剂入药，为不改变其原有物质基础，故选用水作为提取溶媒。
参考文献：
[1]李晶晶.钩藤总碱提取工艺优化及其抗焦虑作用药效学和作用机制的初步研究[D].第三军医大学硕士学位论文，2013.
[2]王瑞俭.钩藤碱提取工艺研究[J].吉林林学院学报，1998，14（2）.
[3]李雅臣.钩藤中钩藤总生物碱提取溶剂的选择探讨[J].天津中医药，2003，20（4）：67.
[4]吕旸，王伽伯等.提取溶剂对何首乌肝细胞毒性的影响[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（20）.
[5]彭国平.应用微生物发酵与超声波联合处理高效提取钩藤[J].现代生物医学进展，2009，9（3）：497.
关键词：桑芪首乌片；提取工艺；钩藤超声提取；总黄酮UV测定
中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2015）06-0086-03
云南省荣誉名中医陆家龙主任医师潜心研究的经验方“桑芪首乌汤”以中医基础理论为依据，主要由桑寄生、黄芪、制首乌、钩藤、天麻、三七须根等十余味天然药物组成。在中医治疗高血压及相关心脑血管疾病时，对于改善患者临床症状及提高生活质量方面是具有较好的疗效。西医对于控制高血压有很多类药物，但其症状改善效果并不尽人意，部分血压虽已控制正常但上述症状仍然持续存在，且大部分药物价格昂贵，长期服用病人负担过重，甚至存在或这或那的副反应。该处方经过了二十余年的临床观察，具有改善症状快、疗效持续平稳，安全、价低等优点，倍受广大患者的认可。现将原有汤剂改为片，以便于患者携带、服用。本实验为片剂提取工艺的研究，为该剂型进一步研究奠定基础。
1仪器和试药
1.1仪器BJ-II崩解时限仪，SHB-III 循环水式多用真空表，电热恒温水浴锅，FN202-2A型 电热干燥箱，KS-3000ULTRASSONIC CLEANER.
1.2试药药品购于云南白药集团股份有限公司中药饮片分公司
2提取
2.1钩藤的提取根据文献[1～2]，钩藤属茜草科植物，为中医传统临床中草药，其性凉，味甘苦，具有清热平肝，息风定惊的功效，临床用于高血压病头晕等。中医学理论中明确提及“钩藤后下”，现代药学研究表明钩藤中所含有效成分钩藤碱，异钩藤碱等受热易破坏，所以在提取过程中，应控制其温度不高于81℃[3]。因此，我们以乙醇浓度，提取时间，液料比为三因素L9（33），干膏得率为指标，优选钩藤超声提取的最佳工艺。因素水平表见表1。
从3个因素的极差来看，影响提取效果的因素顺序A>B>C，即醇浓度是影响最大的因素，其次为提取时间，液料比的影响最小。正交试验结果显示，最佳的提取工艺条件是6倍量60%的乙醇，提取时间为 1 h。
2.2其余药材的提取
2.2.1正交设计有文献报道[4]首乌的乙醇提取物具有肝细胞毒性，且其余药味的有效成分多为皂苷、黄酮等水溶性物质，同时，考虑到乙醇提取在今后大规模生产中对设备等硬件设施的高要求，将剩余药味与钩藤药渣一并进行水煎煮，以液料比、煎煮次数、煎煮时间为三因素L9（33），总黄酮含量和干膏得率为指标，优选最佳提取工艺。因素水平表见表3。
2.2.2总黄酮含量测定（UV法）
2.2.2.1仪器与试药仪器：UV-7502PC（上海尖锐光电科技有限公司）；对照品：芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号为：100080–201309）；供试品：桑芪首乌片干膏，昆明市中医医院提供；试剂：蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2.2.2.2对照品溶液的制备精密称取经 108 ℃ 干燥至恒重的芦丁对照品约10.7 mg，用甲醇溶解，转移入 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，得芦丁对照品溶液浓度为0.107 mg/mL，备用。
2.2.2.3供试品溶液的制备取干膏5 g研细，加入 25 mL甲醇称重，超声30 min，补足重量，过滤，滤液挥干后用水溶解至10 mL，取用等体积乙酸乙酯萃取4次后，回收乙酸乙酯的残渣用甲醇定容至25 mL容量瓶中，即得供试品溶液。
2.2.2.4测定方法量取1 mL供试品溶液置25 mL量瓶中，加5% NaNO2溶液1mL，混匀，放置6 min，加10% Al（NO3）3溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4%NaOH溶液10 mL，放置15 min，甲醇稀释至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白，在500 nm处测定吸光度。连续测定3次，取平均值，以芦丁为对照品，采用标准曲线法测定总黄酮含量。
从3个因素的极差来看，影响提取效果的因素顺序A>B>C，即提取次数是影响最大的因素，其次为提取时间，液料比的影响最小。就A因素来说，2，3水平对结果的影响较为接近，且明显优于1水平；出于降低成本考虑，我们选择了较为经济的工艺，即：8倍量水，提取2次，每次1 h。
3结果与讨论
3.1根据实验结果得到钩藤超声提取的最佳的提取工艺条件是6倍量60%的乙醇，提取 1 h；钩藤醇提后的药渣与其余药味一并用8倍量水，提取2次，每次1 h。该工艺操作简便易行，适用于桑芪首乌片的提取。
3.2根据处方药味组成，方中天麻及钩藤为中药降压之药对，而钩藤中的主要活性成分为钩藤碱和异钩藤碱，但是此类生物碱遇热容易改变。而传统的水煎煮涉及较多高温环节，对其药效影响明显。根据文献报道以乙醇提取为主，但醇提的大生产对设备和环境的限制颇多；也有文献[5]采用超声提取加酵解的方法对钩藤中活性成分提取，得率较高。因此，结合实际，对钩藤采用了超声提取的方法。由于（异）钩藤碱的标准品（含量测定用）无法从中国生物制品检定所购得。基于其热敏性特点，我们在严格控制提取温度的前提下对其收膏率进行量化，在一定程度上极大的保证了其药效学的物质基础。
3.3基于原处方为汤剂入药，为不改变其原有物质基础，故选用水作为提取溶媒。
参考文献：
[1]李晶晶.钩藤总碱提取工艺优化及其抗焦虑作用药效学和作用机制的初步研究[D].第三军医大学硕士学位论文，2013.
[2]王瑞俭.钩藤碱提取工艺研究[J].吉林林学院学报，1998，14（2）.
[3]李雅臣.钩藤中钩藤总生物碱提取溶剂的选择探讨[J].天津中医药，2003，20（4）：67.
[4]吕旸，王伽伯等.提取溶剂对何首乌肝细胞毒性的影响[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（20）.
[5]彭国平.应用微生物发酵与超声波联合处理高效提取钩藤[J].现代生物医学进展，2009，9（3）：497.