【摘 要】
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目的:本实验旨在细胞水平研究毛喉萜(forskolin)对tau蛋白磷酸化、聚集体形成及tau蛋白与微管结合能力的影响.方法:利用基因转染技术建立过度表达人类最长tau(tau441)的人肾
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目的:本实验旨在细胞水平研究毛喉萜(forskolin)对tau蛋白磷酸化、聚集体形成及tau蛋白与微管结合能力的影响.方法:利用基因转染技术建立过度表达人类最长tau(tau441)的人肾母细胞瘤细胞(HEK293),免疫印迹技术检测细胞内tau蛋白的磷酸化状况,tau与微管结合能力改变;免疫荧光技术和thioflavin染色检测细胞内tau蛋白聚集体形成情况.结果:在HEK293转tau细胞株, 总tau蛋白的表达没有明显改变,tau蛋白在Ser214、Ser262和Ser396/404位点过度磷酸化.与此同时,随着tau蛋白的过度磷酸化,tau蛋白与微管的结合能力下降,细胞内有磷酸化的tau蛋白聚集增加.结论:蛋白激酶A的激活可以引起tau蛋白的过度磷酸化,磷酸化的位点包括蛋白激酶A和非蛋白激酶A的磷酸化位点,而过度磷酸化的tau蛋白又损害了tau与微管结合,形成了大量细胞内聚集体,提示了蛋白激酶A的激活可能是超早期阿尔茨海默病病理发展过程的关键因素之一.
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