【摘 要】
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目的探讨诺如病毒（Norovirus,NoV）VP1蛋白的病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）在毕赤酵母表达系统中分泌表达的可行性。方法用pPICZa-A表达载体和X-33毕赤酵母株进行NoV GⅡ.4和GⅡ.17型VP1蛋白的分泌表达,并对阳性菌株进行Mut表型筛选。同时优化起始pH（5.0、6.0、7.0、8.0）、甲醇终浓度（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）及
【机 构】
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中国食品药品检定研究院肠道病毒疫苗室
【基金项目】
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十三五国家科技重大专项（2018ZX09739002-002）；
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目的探讨诺如病毒（Norovirus,NoV）VP1蛋白的病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）在毕赤酵母表达系统中分泌表达的可行性。方法用pPICZa-A表达载体和X-33毕赤酵母株进行NoV GⅡ.4和GⅡ.17型VP1蛋白的分泌表达,并对阳性菌株进行Mut表型筛选。同时优化起始pH（5.0、6.0、7.0、8.0）、甲醇终浓度（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）及发酵时间（24、48、72、96、120 h）3个表达条件。取原始及传代10代菌株,采用优化条件进行发酵,于诱导0～60 h间,通过双标准曲线实时荧光定量PCR法测定外源基因拷贝数。发酵产物经蔗糖密度梯度离心纯化后,检测其浓度及纯度,并观察VLP的形态。结果表达目的蛋白的重组酵母菌株均为Mut+型。最佳发酵pH为7.0,甲醇终浓度为1%,发酵时间为72 h。菌株传代后未发生基因缺失,整合基因在10代内稳定性良好。GⅡ.4及GⅡ.17型VP1纯度均约85%,浓度分别为133和165μg/mL,VP1蛋白均可自发组装成直径约40 nm的VLP颗粒,形态与天然病毒相似。结论用毕赤酵母表达系统进行NoV VP1蛋白VLP分泌表达是可行的。
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