【摘 要】
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目的对按标准化工艺流程制备的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)制剂进行微生物学安全性评价。方法人脐带华通氏胶分离的间充质干细胞培养扩增至P5代。显微镜下观察细胞的形态特征,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达;培养法检测细菌、真菌污染,指示剂培养显色法和快速聚合酶链反应(PCR)法检测支原体污染,鲎试剂凝胶法检测细菌内毒素;胶体金法检验特定人源病毒、梅毒螺旋体;荧光定量PCR法检测人乳头瘤病毒(
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目的对按标准化工艺流程制备的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)制剂进行微生物学安全性评价。方法人脐带华通氏胶分离的间充质干细胞培养扩增至P5代。显微镜下观察细胞的形态特征,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达;培养法检测细菌、真菌污染,指示剂培养显色法和快速聚合酶链反应(PCR)法检测支原体污染,鲎试剂凝胶法检测细菌内毒素;胶体金法检验特定人源病毒、梅毒螺旋体;荧光定量PCR法检测人乳头瘤病毒(HPV)。结果按照标准化流程分离培养hUC-MSCs传代至P5代呈均一的长梭型成纤维细胞样贴壁生长,细胞表面标志物CD73、CD90和CD105阳性率大于98%,CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR<2%;受检人脐带间充质干细胞鲎试剂凝胶法检测内毒素水平小于0.25EU/mL,培养检测未见细菌、真菌菌落生长,指示剂培养显色法和快速PCR检测均显示无支原体污染;胶体金法和荧光定量PCR法检测特定人源病毒、梅毒螺旋体和HPV(包含18种高危亚型)全部为阴性结果。所有检测方法的阳性对照标本均呈阳性结果,证实检测方法稳定可靠。结论本研究采用的标准化干细胞制备工艺流程稳定可靠,采用该工艺制备人脐带间充质干细胞符合临床应用的微生物学安全性要求。
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