论文部分内容阅读
目的
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立结肠癌SW1116细胞系VDR、FoxM1基因敲除的重组体细胞系,并进一步明确CRISPR/Cas9技术能否用于肿瘤细胞转移表型的研究。
方法针对VDR和FoxM1基因设计sgRNA,构建sgRNA质粒后与pMJ920质粒共转染至SW1116细胞系。培养48h后,通过流式分选出GFP阳性细胞,有限稀释培养出单克隆细胞系。Western Blotting验证、基因测序对比获得VDR、FoxM1稳定敲除的单克隆细胞。划痕愈合、Transwell小室实验检测该细胞的迁移和侵袭能力变化。
结果成功获得VDR和FoxM1蛋白表达缺失的SW1116-VK和SW1116-FK重组体癌细胞;VDR蛋白表达缺失后,SW1116细胞的迁移和侵袭能力增强;FoxM1蛋白表达缺失后,SW1116细胞的迁移和侵袭能力减弱。
结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了VDR和FoxM1敲除的SW1116细胞系;CRISPR/Cas9基因编辑技术可以用于研究基因对于肿瘤细胞转移能力的影响。