【摘 要】
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目的:研究滋肾丸(ZSW)对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制,为ZSW治疗DN提供科学依据.方法:自发性糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组(1.0 mg·kg-1)及ZSW高、中、低剂量(6.0,3.0,1.5 g·kg-1)组,非糖尿病db/m小鼠为正常组.模型组和正常组给予等体积去离子水灌胃,其余各组使用相应药物干预12周.每2周检测尾静脉空腹血糖(FBG);每4周检测尿白蛋白/肌酐(ACR),N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和胱抑素
【机 构】
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北京中医药大学东方医院,北京100078;北京中医药大学第二临床医学院,北京100078;北京中医药大学教育部中医养生学重点实验室,北京100029;北京中医药大学,北京100029
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目的:研究滋肾丸(ZSW)对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制,为ZSW治疗DN提供科学依据.方法:自发性糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组(1.0 mg·kg-1)及ZSW高、中、低剂量(6.0,3.0,1.5 g·kg-1)组,非糖尿病db/m小鼠为正常组.模型组和正常组给予等体积去离子水灌胃,其余各组使用相应药物干预12周.每2周检测尾静脉空腹血糖(FBG);每4周检测尿白蛋白/肌酐(ACR),N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和胱抑素C(CysC);给药12周后摘眼球取血,血清检测尿素氮(BUN)和肌酐(SCr);光镜及投射电镜观察肾组织病理学改变;免疫组化法观察分析肾小管上皮EMT标志物表达强度;原位末端标记法(TUNEL)染色观察分析肾小管上皮细胞的核损伤水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EMT标志物、核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白及焦亡相关炎症因子的蛋白表达水平.实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测上述蛋白的mRNA表达水平.结果:与正常组比较,模型组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著升高,肾组织出现病理损伤,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度、蛋白及mRNA表达显著改变,肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率、肾组织焦亡相关炎症因子和NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,ZSW及达格列净组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著降低(P＜0.01),肾组织病理损伤不同程度减轻,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度显著改变(P＜0.01),蛋白及mRNA表达不同程度改变(P＜0.05,P＜0.01),肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率及肾组织焦亡相关炎症因子的蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.01),NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达不同程度降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:ZSW抑制肾小管上皮细胞焦亡及EMT,可能是其治疗DN的作用机制.
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