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中图分类号：S858.31 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2017）03-0026-02
鸡包涵体肝炎（Inclusion Body Hepatitis， IBH）是由Ⅰ群禽腺病毒（Fowl adenovirus Ⅰ， FAV-Ⅰ）引起的一种急性传染病。该病最早发生在巴基斯坦卡拉奇市安卡拉地区，所以也称之为安卡拉病[1]。该病特征性病理变化为心包囊积液和肝炎。目前该病已在我国多地流行，可造成肉鸡、蛋鸡乃至水禽发病死亡，已严重影响养禽业健康发展[2-3]。2016年11月，山东德州某养鸡场发生了以心包淡黄色积液和肝脏淡黄色出血肿胀为特征的疑似鸡包涵体肝炎病例，现将诊断过程介绍如下。
1 发病情况调查
山东德州某养鸡，2016年11月，3周龄肉鸡中零星出现发病，3d之后群体发病或散发死亡。抗生素治疗无效。发病率约为10%，病死率达40%。
2 临床症状
肉鸡鸡群表现减食，精神沉郁，羽毛蓬乱，头及翅膀下垂；嗜睡，卧地。
3 病理变化
剖检病鸡发现：个别鸡肌肉出血；个别腺胃与肌胃交界处出血；肾脏肿大出血；心包大量淡黄色积液（如图1所示）；肝脏颜色淡黄、肿胀及质碎，脾脏肿大出血。
4 实验室诊断
4.1 病料处理 取发病或病死肉鸡的肝脏和脾脏，添加少量盐水，用匀浆器进行研磨；匀浆液反复冻融三次，离心取上清。上清冻存至-80℃冰箱。
4.2 病毒RT-PCR鉴定
4.2.1 引物设计 根据GenBank KU877428的mRNA序列，利用Prime 5.0软件，设计扩增长度约749bp基因。引物合成单位为生工生物工程（上海）股份有限公司。扩增IBDV VP3的引物序列如下：
上游引物：5′-TCTTCGACACGTCCATCAACT-3′
下游引物：5′-TTACACGGCGTTGCCTGT-3′
4.2.2 病毒RNA基因組提取 Trizol法提取病毒RNA。详细操作方法如下：将上述4.1中-80℃冻存的上清为提取病毒RNA基因组的样本；取1.5ml EP管（注：提RNA所用到的EP管均需DEPC处理）1个，先加入250μl上清、再加入750μl Trizol试剂，涡旋混匀、室温静置5min；再加入200μl氯仿，然后上下颠倒摇动数次、室温静置10min；以4℃ 12，000rmp离心10min；取上层液体400μl加入至另1新的1.5ml EP管中，再加入异丙醇（预冷的）200μl，混匀于-20℃放置30min；以4℃ 12，000rmp离心10min；弃上清液，用75%乙醇溶液（预冷的）洗涤沉淀；以4℃ 12，000rmp离心10min；弃上清液，将该EP管放置室温或37℃温箱干燥10min；加入30μl含DEPC的灭菌水，得到的溶液即为病毒的RNA基因组。
4.2.3 病毒的RT-PCR 反转录步骤为：取1.5ml EP管（注：提RNA所用到的EP管均需DEPC处理）1个，加入RNA提取物10μl、下游引物（20μM）2μl，70℃水浴10min；取出后再加入5×first stand buffer 4μl、dNTP（10mM）3μl、M-MLV酶1.0μl，放置42℃水浴60min；取出后放置70℃水浴15min。得到的溶液即为cDNA。
PCR体系：cDNA4μl、上游引物（20μM）和下游引物（20μM）各0.5μl、10×PCR Buffer2.5μl、dNTP（10mM）1.0μl、灭菌水16.5μl。PCR反应程序：94℃3min、94℃30s、55℃45s、55℃45s，35个循环。
PCR产物琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物用琼脂糖凝胶（浓度为1%）电泳检测。电泳结果与设计扩增大小片段相符（设计片段大小为749bp）。结果见图2。
病毒的RT-PCR鉴定结果显示该发病鸡群病原为Ⅰ群禽腺病毒。
5 治疗
5.1 所有发病雏鸡舍应彻底清扫，用2%次氯酸钠溶液消毒。
5.2 减小饲养密度，加强通风换气。
5.3 对所有发病鸡群的雏鸡鸡群进行补液，补充Vc和电解质。
5.4 对发病鸡舍所有鸡群紧急接种Ⅰ群禽腺病毒高免卵黄抗体。
5.5 发病鸡舍附近其他鸡舍紧急接种Ⅰ群禽腺病毒灭活疫苗。
通过以上措施的治疗与控制，1周后回访该养殖场，发病鸡群明显好转并且已几乎未见死亡病鸡。
参考文献：
[1] 殷震，刘景华主编.动物病毒学（第二版）[M].北京：科学技术出版社，1997.
[2] 陈鸿军.最新管关注：腺病毒引起的HHS[J].中国家禽，2004，26（19）：30.
[3] 袁万哲，李玉保，王建昌，等.鸡心包积液-肝炎综合征的初步研究[J].中国兽医科学，2016，46（2）：157-160.
鸡包涵体肝炎（Inclusion Body Hepatitis， IBH）是由Ⅰ群禽腺病毒（Fowl adenovirus Ⅰ， FAV-Ⅰ）引起的一种急性传染病。该病最早发生在巴基斯坦卡拉奇市安卡拉地区，所以也称之为安卡拉病[1]。该病特征性病理变化为心包囊积液和肝炎。目前该病已在我国多地流行，可造成肉鸡、蛋鸡乃至水禽发病死亡，已严重影响养禽业健康发展[2-3]。2016年11月，山东德州某养鸡场发生了以心包淡黄色积液和肝脏淡黄色出血肿胀为特征的疑似鸡包涵体肝炎病例，现将诊断过程介绍如下。
1 发病情况调查
山东德州某养鸡，2016年11月，3周龄肉鸡中零星出现发病，3d之后群体发病或散发死亡。抗生素治疗无效。发病率约为10%，病死率达40%。
2 临床症状
肉鸡鸡群表现减食，精神沉郁，羽毛蓬乱，头及翅膀下垂；嗜睡，卧地。
3 病理变化
剖检病鸡发现：个别鸡肌肉出血；个别腺胃与肌胃交界处出血；肾脏肿大出血；心包大量淡黄色积液（如图1所示）；肝脏颜色淡黄、肿胀及质碎，脾脏肿大出血。
4 实验室诊断
4.1 病料处理 取发病或病死肉鸡的肝脏和脾脏，添加少量盐水，用匀浆器进行研磨；匀浆液反复冻融三次，离心取上清。上清冻存至-80℃冰箱。
4.2 病毒RT-PCR鉴定
4.2.1 引物设计 根据GenBank KU877428的mRNA序列，利用Prime 5.0软件，设计扩增长度约749bp基因。引物合成单位为生工生物工程（上海）股份有限公司。扩增IBDV VP3的引物序列如下：
上游引物：5′-TCTTCGACACGTCCATCAACT-3′
下游引物：5′-TTACACGGCGTTGCCTGT-3′
4.2.2 病毒RNA基因組提取 Trizol法提取病毒RNA。详细操作方法如下：将上述4.1中-80℃冻存的上清为提取病毒RNA基因组的样本；取1.5ml EP管（注：提RNA所用到的EP管均需DEPC处理）1个，先加入250μl上清、再加入750μl Trizol试剂，涡旋混匀、室温静置5min；再加入200μl氯仿，然后上下颠倒摇动数次、室温静置10min；以4℃ 12，000rmp离心10min；取上层液体400μl加入至另1新的1.5ml EP管中，再加入异丙醇（预冷的）200μl，混匀于-20℃放置30min；以4℃ 12，000rmp离心10min；弃上清液，用75%乙醇溶液（预冷的）洗涤沉淀；以4℃ 12，000rmp离心10min；弃上清液，将该EP管放置室温或37℃温箱干燥10min；加入30μl含DEPC的灭菌水，得到的溶液即为病毒的RNA基因组。
4.2.3 病毒的RT-PCR 反转录步骤为：取1.5ml EP管（注：提RNA所用到的EP管均需DEPC处理）1个，加入RNA提取物10μl、下游引物（20μM）2μl，70℃水浴10min；取出后再加入5×first stand buffer 4μl、dNTP（10mM）3μl、M-MLV酶1.0μl，放置42℃水浴60min；取出后放置70℃水浴15min。得到的溶液即为cDNA。
PCR体系：cDNA4μl、上游引物（20μM）和下游引物（20μM）各0.5μl、10×PCR Buffer2.5μl、dNTP（10mM）1.0μl、灭菌水16.5μl。PCR反应程序：94℃3min、94℃30s、55℃45s、55℃45s，35个循环。
PCR产物琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物用琼脂糖凝胶（浓度为1%）电泳检测。电泳结果与设计扩增大小片段相符（设计片段大小为749bp）。结果见图2。
病毒的RT-PCR鉴定结果显示该发病鸡群病原为Ⅰ群禽腺病毒。
5 治疗
5.1 所有发病雏鸡舍应彻底清扫，用2%次氯酸钠溶液消毒。
5.2 减小饲养密度，加强通风换气。
5.3 对所有发病鸡群的雏鸡鸡群进行补液，补充Vc和电解质。
5.4 对发病鸡舍所有鸡群紧急接种Ⅰ群禽腺病毒高免卵黄抗体。
5.5 发病鸡舍附近其他鸡舍紧急接种Ⅰ群禽腺病毒灭活疫苗。
通过以上措施的治疗与控制，1周后回访该养殖场，发病鸡群明显好转并且已几乎未见死亡病鸡。
参考文献：
[1] 殷震，刘景华主编.动物病毒学（第二版）[M].北京：科学技术出版社，1997.
[2] 陈鸿军.最新管关注：腺病毒引起的HHS[J].中国家禽，2004，26（19）：30.
[3] 袁万哲，李玉保，王建昌，等.鸡心包积液-肝炎综合征的初步研究[J].中国兽医科学，2016，46（2）：157-160.