【摘 要】
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目的探索线粒体超氧离子（superoxides,O-2）是否参与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的细胞外基质纤维化。方法培养大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）,AngⅡ刺激24 h后进行活细胞线粒体荧光染色（m
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目的探索线粒体超氧离子（superoxides,O-2）是否参与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的细胞外基质纤维化。方法培养大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）,AngⅡ刺激24 h后进行活细胞线粒体荧光染色（mitosox）以检测细胞内的线粒体O-2;采用酶标仪和流式细胞术检测线粒体超氧离子含量和分布;利用Real-time PCR、Western blot及免疫荧光检测AngⅡ对细胞外基质胶原蛋白-Ⅰ（collagen-Ⅰ,Col-Ⅰ）、胶原蛋白-Ⅲ（collagen-Ⅲ,Col-Ⅲ）和纤维连接蛋白（fibronectin,FN）表达的影响;并进一步检测NADPH氧化酶抑制剂罗布麻宁（apocynin,APO）对下游超氧离子合成以及ColⅠ、ColⅢ和FN表达的影响。结果 AngⅡ明显促进大鼠肾脏成纤维细胞O-2的生成以及细胞外基质Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的表达。Apo可显著抑制AngⅡ所引起的肾成纤维细胞中O-2表达,而AngⅡ诱导的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的合成作用亦被APO阻断。结论线粒体O-2介导了AngⅡ诱导的肾脏成纤维细胞的细胞外基质蛋白的合成,采用APO抑制O-2的表达,可使纤维化程度减轻。
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