人Shh基因重组过表达慢病毒载体的构建与鉴定

来源 :中国实验诊断学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：bingdaogege

【摘要】

：

目的构建人Shh基因过表达慢病毒载体，转染293T细胞，建立稳定转染人Shh基因的293T的细胞系。方法设计引物引入AgeI酶切位点，使用PCR方法从质粒中扩增Shh基因的编码区序列，对所扩增

【作者】

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边学海赵吉生徐为然张广张大奇周乐孙辉

【机构】

：

吉林大学中日联谊医院甲状腺外科,吉林大学中日联谊医院胃肠外科,吉林大学第一医院胃肠内科

【出处】

：

中国实验诊断学

【发表日期】

：

2013年11期

【关键词】

：

甲状腺乳头状癌 SHH 免疫组织化学 Papillary thyroid carcinoma Shh protein Immunohistochemistry

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目的构建人Shh基因过表达慢病毒载体，转染293T细胞，建立稳定转染人Shh基因的293T的细胞系。方法设计引物引入AgeI酶切位点，使用PCR方法从质粒中扩增Shh基因的编码区序列，对所扩增出的目的片段回收纯化。将AgeI内切酶消化后目的片段交换连接人pGC-FU载体，构建Shh慢病毒表达载体pGC-FU-Shh。酶切验证并测序正确后，将质粒pGC-Fu-Shh与携带GFP的慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞，荧光显微镜检测慢病毒载体转染细胞的结果，重组质粒pGC-Fu-Shh的测序，Westernb

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