【摘 要】
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利用改良的CTAB法提取高质量的DNA,对菠菜AFLP反应体系中酶切与连接、预扩增、选择性扩增等关键试验条件进行优化,建立了适合菠菜AFLP分析的反应体系:酶切连接采用一步法,即
【机 构】
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山西师范大学生命科学学院 山西临汾041000北京市农林科学院蔬菜研究中心 北京 100097;北京市农林科学院蔬菜研究中心 北京 100097;农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室 北京
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利用改良的CTAB法提取高质量的DNA,对菠菜AFLP反应体系中酶切与连接、预扩增、选择性扩增等关键试验条件进行优化,建立了适合菠菜AFLP分析的反应体系:酶切连接采用一步法,即模板DNA150 ng,EcoRⅠ /Mse Ⅰ各0.25U,37℃酶切5h,16℃连接6h;预扩增体系浓度dNTPs 0.2 mmol/L,Mg2+ 1.5 mmol/L,预扩增产物稀释200倍作为选择性扩增体系模板.利用优化的反应体系,从256对E+ANN/M+ANN引物组合中,筛选出20对条带清晰、多态性丰富的引物组合,为菠菜群体的遗传多样性、种质鉴定等研究提供了理论基础.
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