【摘 要】
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目的 建立超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法,分析沼虾中的过敏原蛋白.方法 基于Bottomup(自下而上)蛋白分析策略,采用Tris-HCl提取罗氏沼虾样品中的目标蛋白,胰
【机 构】
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浙江省疾病预防控制中心,浙江杭州310051
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目的 建立超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法,分析沼虾中的过敏原蛋白.方法 基于Bottomup(自下而上)蛋白分析策略,采用Tris-HCl提取罗氏沼虾样品中的目标蛋白,胰蛋白酶40 ℃C消化6h,肽段经过色谱分离后采用四极杆静电场轨道离子阱质谱(Full MS/dd-MS2监测模式,TopN=10)测定,利用UniProt蛋白数据库和Proteome Discoverer软件鉴定过敏原蛋白.结果 获得4种过敏原蛋白,分别为原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌浆钙结合蛋白和血蓝蛋白,肽段覆盖率分别为53％、36％、12％和12％,翻译后修饰的位点有天冬氨酸(D)的甲基化,天冬酰氨(N)和谷氨酰氨(Q)的脱酰氨化以及蛋氨酸(M)的氧化.结论 超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱能获得丰富的肽段及碎片信息,灵敏度和分辨率较高,可用于虾及虾制品的过敏原蛋白鉴定和分析.
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