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目的 通过外泌体小RNA测序技术，比较慢性肾脏病3～4期糖尿病肾脏疾病（DKD）湿热证患者与正常人群尿液外泌体微RNA（miRNA）的差异表达。方法 2021年4月—2022年4月于安徽中医药大学第一附属医院招募受试者，DKD湿热证患者40例，健康体检正常者40名。2组分别任选10名/例受试者，对尿液外泌体进行miRNA高通量测序，以log2（Fold Change）绝对值≥1及q值＜0.05为条件筛选出所有差异表达miRNA,然后进一步筛选出10个miRNA进行验证，筛选条件为：（1）2组样本中，至少1组组内平均表达量（TPM）＞2;（2） log2（Fold Change）绝对值≥2;（3） DKD湿热证组中至少有1个样本TPM＞0。最后通过定量RT-PCR在2组受试者中进行验证。结果 将DKD湿热证组及正常对照组的测序数据与数据库miRNA成熟序列进行对比，正常对照组表达的miRNA为302个，DKD湿热证组表达的miRNA为386个，2组共同表达的miRNA为263个。得出97个有差异表达的miRNA,其中上调的84个，下调的13个。DKD湿热证组患者尿液miR-664a-5p、miR-320b及miR-199a-5p表达水平较正常对照组上调（P＜0.001）。miR-664a-5p、miR-320b及miR-199a-5p在诊断DKD湿热证中的受试者工作特征曲线下面积分别为0.886、0.923及0.761。结论 慢性肾脏病3～4期DKD湿热证患者尿液外泌体miRNA与正常人群比较存在差异表达；尿液外泌体miR-664a-5p、miR-320b和miR-199a-5p有助于DKD湿热证患者的诊断。