【摘 要】
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为了获得大量纯度较高的猪FKBP5重组蛋白,本实验通过构建FKBP5原核表达载体,以实现FKBP5蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定.以荣昌猪胸腺cDNA为模板,PCR扩增FKBP5基因CDS区后,将其与pET-28a连接,获得pET-28a-FKBP5重组表达质粒,并将重组质粒转化进大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,获得包含pET-28a-FKBP5重组表达质粒的蛋白表达菌株;利用IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE鉴定其表达情况,利用Ni柱亲和层吸法纯化蛋白,并对纯化的蛋白进行Western
【机 构】
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重庆市畜牧科学院, 重庆 402460;绥江县动物卫生监督所,云南昭通 657000
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为了获得大量纯度较高的猪FKBP5重组蛋白,本实验通过构建FKBP5原核表达载体,以实现FKBP5蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定.以荣昌猪胸腺cDNA为模板,PCR扩增FKBP5基因CDS区后,将其与pET-28a连接,获得pET-28a-FKBP5重组表达质粒,并将重组质粒转化进大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,获得包含pET-28a-FKBP5重组表达质粒的蛋白表达菌株;利用IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE鉴定其表达情况,利用Ni柱亲和层吸法纯化蛋白,并对纯化的蛋白进行Western-blot鉴定.结果表明,实验成功构建了重组表达质粒pET-28a-FKBP5;表达产物SDS-PAGE和Western-blot鉴定结果显示,在51 ku附近出现特异性条带,表明纯化回收的蛋白确为目的蛋白;1 mmol/L的IPTG诱导2 h是诱导蛋白表达的最适条件.实验成功表达了大量纯度比较高的FKBP5蛋白,可为进一步研究FKBP5蛋白的生物学功能以及猪抗病育种研究提供理论依据.
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