【摘 要】
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目的 研究miR-17-92基因簇在人胃癌组织中的表达情况和临床意义,并探讨过表达miR-17-92对胃癌细胞生物学特性的影响及潜在机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织及其对应的癌旁正常组织中的表达差异,并分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征的相关性.运用含过表达miR-17-92质粒的慢病毒上清感染MGC-803细胞,并用嘌呤霉素筛选出单克隆细胞,进一步扩增得到稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株.采用xCelligen
【机 构】
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苏州大学附属第一医院消化科,江苏苏州 215006;苏州大学附属第一医院中心实验室,江苏苏州 215006;苏州大学附属第一医院普外科,江苏苏州 215006
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目的 研究miR-17-92基因簇在人胃癌组织中的表达情况和临床意义,并探讨过表达miR-17-92对胃癌细胞生物学特性的影响及潜在机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织及其对应的癌旁正常组织中的表达差异,并分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征的相关性.运用含过表达miR-17-92质粒的慢病毒上清感染MGC-803细胞,并用嘌呤霉素筛选出单克隆细胞,进一步扩增得到稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株.采用xCelligence系统实时动态监测MGC-803-miR-17-92胃癌细胞及其对照组细胞的生长情况及侵袭能力.运用Western blot法检测两组细胞中AKT、ERK1/2信号通路相关分子及Integrinβ1蛋白的表达.通过明胶酶谱实验检测两组细胞上清培养液中MMP-2和MMP-9的活性.结果 miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织中的表达均较癌旁正常组织显著升高.miR-17-92基因簇各亚单位的表达水平均与胃癌患者的TNM分期呈正相关,其中miR-17、miR-20的表达水平与胃癌患者的肿瘤分化程度呈正相关,miR-19a、miR-19b、miR-92的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小呈正相关.成功构建了稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株.MGC-803-miR-17-92细胞的生长速度明显快于MGC-803-control细胞.两组细胞中总的AKT蛋白表达水平差异无统计学意义,然而MGC-803-miR-17-92细胞中AKT蛋白在苏氨酸308位点的磷酸化水平较MGC-803-control细胞显著升高,而其在丝氨酸473位点的磷酸化水平在两组细胞中差异无统计学意义.两组细胞中总的ERK1/2蛋白表达水平差异无统计学意义,然而MGC-803-miR-17-92细胞中磷酸化的ERK1/2蛋白表达显著高于对照组MGC-803-control细胞.MGC-803-miR-17-92细胞的侵袭能力显著强于MGC-803-control细胞.MGC-803-miR-17-92细胞中Integrinβ1的蛋白表达水平及MMP-2的活性显著高于MGC-803-control细胞.结论 miR-17-92基因簇在人胃癌组织中的表达水平较癌旁正常组织显著升高,并与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度及TNM分期呈正相关.过表达miR-17-92能够显著加快MGC-803细胞的生长,该过程与AKT及ERK1/2信号通路的活化相关.过表达miR-17-92能够显著增强MGC-803细胞的侵袭能力,其机制与Integrinβ1的表达上调及MMP-2的活性增强有关.
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