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（1.長沙民政学院，长沙410004；2.湘潭市中心医院，湘潭，400011；3.湖南中医药大学，长沙,410007）
【摘要】目的：研究不同白术样品中两种白术内酯的变化，为白术的质量控制提供依据。方法：HPLC法。结果：不同采收时期白术含两种白术内酯的含量变化无明显规律，在不同提取方法实验中以甲醇超声波提取最优，不同产地实验中以湖南平江白术两种白术内酯含量最高。结论：白术药材中两种白术内酯含量受产地和提取方法的影响较大，与采收时期无明显相关性。
【关键词】HPLC；白术内酯；不同样品
【中图分类号】S567.23+3【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)02-0004-02
Studies on esterⅠand Ⅲ in the Different samples
from Atractylodes macrocephala koidz
WU Jia1WANG Yanping2LIU Xiangdan3KUANG Yanhui3
（1.ChangSha Social Work College,Changsha Hunan,410004；2.XiangTan Central Hospital,XiangTan Hunan, 400011；
3.Hunan University of Traditional Chinese Medicine，ChangSha Hunan , 410007）【Abstract】:0bjective: Studieing on esterⅠand Ⅲ in the Atractylodes macrocephala koidz and Proviing the basis for the Quality Control of Atractylodes macrocephala koidz. Methods: HPLC.Results: the content of inner esterⅠand Ⅲ in Atractylodes macrocephala koidz had no orderliness in different collection time,About the different distill methods the ultrasonic wave with methanol is best,About the different producing area,The cotent of Atractylodes macrocephala koidz from PingJiang is the first.Conclusion:The producing area and distill methods do more impact in the content of two type of ester than collection time.【Key words】:HPLC；ester in the Atractylodes macrocephala koidz；different samples
中药白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephala koidz的干燥根茎[1]。神农本草列为上品，具有健脾益气、燥湿利水、止汗安胎功效。白术根茎中含挥发油、倍半萜内酯化合物等，其中自术内酯类成分(白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ)为白术的抗炎、抗癌有效成分，经实验表明，该类成分具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用，尤其白术内酯I药理作用明显，白术内酯I、白术内酯Ⅲ也为白术的特征性成分[2]。用HPLC对不同提取方法、不同采收期和产地的白术样品中两种白术内酯的含量进行比较研究，未见报道。
1材料、仪器与试剂
白术药材为2005年采自湖南省平江县白术种植基地，另于同期在市场购湖南平江,隆回和浙江,安徽,河北五地白术饮片。Agilent 1100高效液相色谱仪， Agilent 1100晶体二极管阵列检测器(DAD),四元泵，Agilent色谱工作站.
白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ标准品由湖南省药品检验所提供,纯度>99%,甲醇为色谱纯,水为重蒸水(自制)。
2色谱条件
色谱柱:Kromasil-ODS柱(4.6 X 200mm,5 u m ) (Scienhome)；柱温:30℃；流动相:甲醇一水(54:46)；流速:1.Om L/min；进样量: 10uL.紫外检测波长:220nm。理论板数按白术内酯I计不低于3000，主色谱峰与相邻其它色谱峰的分离度不小于2，拖尾因子1.020。
3方法和结果
3.1供试品溶液的制备
3.1.1超声波溶剂提取发精密称取白术粉末(过40目筛)1.000g ,置于具塞三角瓶中，加提取溶剂10.0m1,超声提30min,离心(3500r/min)1Omin，10 m1容量瓶定容得供试品溶液，0.45um微孔滤膜过滤得待测液；回收溶剂后用甲醇于10m1容量瓶定容过滤后得供试品溶液。
3.1.2水蒸气蒸馏法精密称取粉碎过20目筛的干燥白术粉末100g，装入1000ml的圆底烧瓶中,加蒸馏水400ml,浸泡过夜,安装挥发油测定器和冷凝装置,用电热套加热至沸,调温度保持微沸6h停止加热,冷却后收集挥发油,用适量乙酸乙酯充分溶解并转入50ml的容量瓶中，用适量甲醇定容制成供试品溶液。
3.2对照品和样品的色谱行为按上述条件，对白术内酯I、Ⅲ对照品和样品进行测定，样品中与对照品的保留值处有相应的色谱峰，且与杂质得到较好的分离(色谱图见图1)。
样品峰
3.3线性关系精密称取白术内酯I、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加甲醇制成含白术内酯I、白术内酯Ⅲ各10 .6 ug/ml的混合对照品溶液。精密吸取混合对照品2uL, 5uL, 10uL, 15uL, 20uL,进样分析，以进样量ng对AI、AⅢ作线性回归,得两个组分的回归方程,白术内酯I:YI=3.24014X-0.63026r=0.999056 ,线性范围：48.47038～450.12244白术内酯Ⅲ:YⅢ=2.14063X+1.695000 r=0.99966 ,线性范围:68.22203～697.97000。结果表明两组分均成良好的线性。
3.4精密度试验对同一对照品溶液连续进样6次，每次10uL，以峰面积计算白术内酯I和白术内酯Ⅲ的精密度，其RSD分别为1.067%和1.059%。
3.5稳定性试验对同一样品溶液每隔2h连续6次进样,结果表明样品在12h内稳定, 以峰面积计算白术内酯I、白术内酯Ⅲ的RSD分别为1.45%及1.39%。
3.6样品重复性实验精密称取同批白术药材粉1.000g，共6份按“供试品溶液的制备”下方法提取，测定，以峰面积计算白术内酯I、白术内酯Ⅲ的RSD分别为1.14%和1.16%。
3.7加样回收率实验精密称取己知含量的平江白术饮片粉末约0.21g共6份，每份各精密加入上述混合对照品溶液53ug, 63ug, 74ug，按“供试品溶液的制备”项下进行处理并测定，计算回收率，得白术内酯I的平均回收率为100. 07%, RSD为1.49%白术内酯III的平均回收率为98.64%, RSD为1.20%。
3.8样品测定精密称取各样品白术粉末1.000g,按“供试品溶液的制备”下进行处理并测定,结果见表1。
4讨论
由表1可知，用正己烷为溶剂提取时两种白术内酯含量均最低，用甲醇提取时白术内酯Ⅰ含量最高，用乙醚提取时白术内酯Ⅲ含量最高，考虑到白术内酯Ⅰ为白术的主要活性成分，也为白术质量控制的主要指标，建议选取甲醇为白术内酯超声波提取溶剂。曾实验不同提取时间（15，30，45，60min）及不同提取次数（1，2，3次）对甲醇超声波提取条件的影响，结果表明用甲醇超声波提取一次，每次30min可提取完全。由表1可知，不同采收时期白术所含两种白术内酯的含量变化无明显规律，龙门和长寿白术的白术内酯I和白术内酯Ⅲ均在10月11日达到最高值。且两种白术内酯的含量都较低，白术内酯I在龙门和长寿两地的平均含量分别为0.0398%和0.0209%，白术内酯Ⅲ在两地的平均含量分别为0.0375%和0.0201%。从表六可看出白术饮片中两种白术内酯的含量普遍较原药材高,表明白术经净制加工后质量较原药材优.在五个不同产地的比较实验研究中，湖南省平江县产白术药材的两种白术内酯含量均高于浙江省于潜县的，而河北行唐产白术药材的两种白术内酯含量均最低。湖南省平江县和浙江省于潜县是历史上白术的道地药材产区，两地所产药材有效成分白术内酯含量高。从内在品质上进一步说明了道地药材质量的优良性。为确保色谱定性的准确性，除采用上述流动相外，曾以甲醇一水(60:40), (55:45), (54:46)等作为流动相，进行了样品与标准品的定性比较，表明样品中均有与标准品一致的保留值。实验过程中选用了几个不同波长进行测定紫外含量测定，发现在222nm处，两种白术内酯都有最大吸收，故实验选择了222nm作为测定波长。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典20O5年版一部[S].北京:化学工业出版社,2OO5:68
[2]李伟,文红梅,张爱华,等.白术质量标准研究——HPLC法测定2种白术内酯的含量[J].药物分析杂志,2001,21（3）:170
(收稿日期：2009.1.1)
【摘要】目的：研究不同白术样品中两种白术内酯的变化，为白术的质量控制提供依据。方法：HPLC法。结果：不同采收时期白术含两种白术内酯的含量变化无明显规律，在不同提取方法实验中以甲醇超声波提取最优，不同产地实验中以湖南平江白术两种白术内酯含量最高。结论：白术药材中两种白术内酯含量受产地和提取方法的影响较大，与采收时期无明显相关性。
【关键词】HPLC；白术内酯；不同样品
【中图分类号】S567.23+3【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)02-0004-02
Studies on esterⅠand Ⅲ in the Different samples
from Atractylodes macrocephala koidz
WU Jia1WANG Yanping2LIU Xiangdan3KUANG Yanhui3
（1.ChangSha Social Work College,Changsha Hunan,410004；2.XiangTan Central Hospital,XiangTan Hunan, 400011；
3.Hunan University of Traditional Chinese Medicine，ChangSha Hunan , 410007）【Abstract】:0bjective: Studieing on esterⅠand Ⅲ in the Atractylodes macrocephala koidz and Proviing the basis for the Quality Control of Atractylodes macrocephala koidz. Methods: HPLC.Results: the content of inner esterⅠand Ⅲ in Atractylodes macrocephala koidz had no orderliness in different collection time,About the different distill methods the ultrasonic wave with methanol is best,About the different producing area,The cotent of Atractylodes macrocephala koidz from PingJiang is the first.Conclusion:The producing area and distill methods do more impact in the content of two type of ester than collection time.【Key words】:HPLC；ester in the Atractylodes macrocephala koidz；different samples
中药白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephala koidz的干燥根茎[1]。神农本草列为上品，具有健脾益气、燥湿利水、止汗安胎功效。白术根茎中含挥发油、倍半萜内酯化合物等，其中自术内酯类成分(白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ)为白术的抗炎、抗癌有效成分，经实验表明，该类成分具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用，尤其白术内酯I药理作用明显，白术内酯I、白术内酯Ⅲ也为白术的特征性成分[2]。用HPLC对不同提取方法、不同采收期和产地的白术样品中两种白术内酯的含量进行比较研究，未见报道。
1材料、仪器与试剂
白术药材为2005年采自湖南省平江县白术种植基地，另于同期在市场购湖南平江,隆回和浙江,安徽,河北五地白术饮片。Agilent 1100高效液相色谱仪， Agilent 1100晶体二极管阵列检测器(DAD),四元泵，Agilent色谱工作站.
白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ标准品由湖南省药品检验所提供,纯度>99%,甲醇为色谱纯,水为重蒸水(自制)。
2色谱条件
色谱柱:Kromasil-ODS柱(4.6 X 200mm,5 u m ) (Scienhome)；柱温:30℃；流动相:甲醇一水(54:46)；流速:1.Om L/min；进样量: 10uL.紫外检测波长:220nm。理论板数按白术内酯I计不低于3000，主色谱峰与相邻其它色谱峰的分离度不小于2，拖尾因子1.020。
3方法和结果
3.1供试品溶液的制备
3.1.1超声波溶剂提取发精密称取白术粉末(过40目筛)1.000g ,置于具塞三角瓶中，加提取溶剂10.0m1,超声提30min,离心(3500r/min)1Omin，10 m1容量瓶定容得供试品溶液，0.45um微孔滤膜过滤得待测液；回收溶剂后用甲醇于10m1容量瓶定容过滤后得供试品溶液。
3.1.2水蒸气蒸馏法精密称取粉碎过20目筛的干燥白术粉末100g，装入1000ml的圆底烧瓶中,加蒸馏水400ml,浸泡过夜,安装挥发油测定器和冷凝装置,用电热套加热至沸,调温度保持微沸6h停止加热,冷却后收集挥发油,用适量乙酸乙酯充分溶解并转入50ml的容量瓶中，用适量甲醇定容制成供试品溶液。
3.2对照品和样品的色谱行为按上述条件，对白术内酯I、Ⅲ对照品和样品进行测定，样品中与对照品的保留值处有相应的色谱峰，且与杂质得到较好的分离(色谱图见图1)。
样品峰
3.3线性关系精密称取白术内酯I、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加甲醇制成含白术内酯I、白术内酯Ⅲ各10 .6 ug/ml的混合对照品溶液。精密吸取混合对照品2uL, 5uL, 10uL, 15uL, 20uL,进样分析，以进样量ng对AI、AⅢ作线性回归,得两个组分的回归方程,白术内酯I:YI=3.24014X-0.63026r=0.999056 ,线性范围：48.47038～450.12244白术内酯Ⅲ:YⅢ=2.14063X+1.695000 r=0.99966 ,线性范围:68.22203～697.97000。结果表明两组分均成良好的线性。
3.4精密度试验对同一对照品溶液连续进样6次，每次10uL，以峰面积计算白术内酯I和白术内酯Ⅲ的精密度，其RSD分别为1.067%和1.059%。
3.5稳定性试验对同一样品溶液每隔2h连续6次进样,结果表明样品在12h内稳定, 以峰面积计算白术内酯I、白术内酯Ⅲ的RSD分别为1.45%及1.39%。
3.6样品重复性实验精密称取同批白术药材粉1.000g，共6份按“供试品溶液的制备”下方法提取，测定，以峰面积计算白术内酯I、白术内酯Ⅲ的RSD分别为1.14%和1.16%。
3.7加样回收率实验精密称取己知含量的平江白术饮片粉末约0.21g共6份，每份各精密加入上述混合对照品溶液53ug, 63ug, 74ug，按“供试品溶液的制备”项下进行处理并测定，计算回收率，得白术内酯I的平均回收率为100. 07%, RSD为1.49%白术内酯III的平均回收率为98.64%, RSD为1.20%。
3.8样品测定精密称取各样品白术粉末1.000g,按“供试品溶液的制备”下进行处理并测定,结果见表1。
4讨论
由表1可知，用正己烷为溶剂提取时两种白术内酯含量均最低，用甲醇提取时白术内酯Ⅰ含量最高，用乙醚提取时白术内酯Ⅲ含量最高，考虑到白术内酯Ⅰ为白术的主要活性成分，也为白术质量控制的主要指标，建议选取甲醇为白术内酯超声波提取溶剂。曾实验不同提取时间（15，30，45，60min）及不同提取次数（1，2，3次）对甲醇超声波提取条件的影响，结果表明用甲醇超声波提取一次，每次30min可提取完全。由表1可知，不同采收时期白术所含两种白术内酯的含量变化无明显规律，龙门和长寿白术的白术内酯I和白术内酯Ⅲ均在10月11日达到最高值。且两种白术内酯的含量都较低，白术内酯I在龙门和长寿两地的平均含量分别为0.0398%和0.0209%，白术内酯Ⅲ在两地的平均含量分别为0.0375%和0.0201%。从表六可看出白术饮片中两种白术内酯的含量普遍较原药材高,表明白术经净制加工后质量较原药材优.在五个不同产地的比较实验研究中，湖南省平江县产白术药材的两种白术内酯含量均高于浙江省于潜县的，而河北行唐产白术药材的两种白术内酯含量均最低。湖南省平江县和浙江省于潜县是历史上白术的道地药材产区，两地所产药材有效成分白术内酯含量高。从内在品质上进一步说明了道地药材质量的优良性。为确保色谱定性的准确性，除采用上述流动相外，曾以甲醇一水(60:40), (55:45), (54:46)等作为流动相，进行了样品与标准品的定性比较，表明样品中均有与标准品一致的保留值。实验过程中选用了几个不同波长进行测定紫外含量测定，发现在222nm处，两种白术内酯都有最大吸收，故实验选择了222nm作为测定波长。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典20O5年版一部[S].北京:化学工业出版社,2OO5:68
[2]李伟,文红梅,张爱华,等.白术质量标准研究——HPLC法测定2种白术内酯的含量[J].药物分析杂志,2001,21（3）:170
(收稿日期：2009.1.1)