【摘 要】
：
目的 构建结核分枝杆菌H37Rv 株esat-6-cfp-10(简称ec)融合基因及其原核表达载体pET-23b(+).esat-6-cfp-10[以下简称pET-23b(+)-ec],表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10(简称r
【机 构】
：
浙江省医学科学院寄生虫病研究所,杭州市红十字会医院检验科,American Colorado University
论文部分内容阅读
目的 构建结核分枝杆菌H37Rv 株esat-6-cfp-10(简称ec)融合基因及其原核表达载体pET-23b(+).esat-6-cfp-10[以下简称pET-23b(+)-ec],表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10(简称rEC),并分析其免疫反应性.方法 采用基因拼接技术将ESAT-6和CFP-10编码基因用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser)3进行PCR扩增融合.构建TA克隆载体pMD 19-T-esat-6-cfp-10(简称pMD+ 19-T-ec),利用PCR、酶切和测序进行鉴定.经限制性内切酶Nde Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切后将融合基因定向克隆入原核表达载体pET-23b(+).将构建正确的重组质粒pET-23b(+).ec转化E.coli BL21(DE3)pLysE,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导rEC的表达.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Westem印迹法分析其表达情况.用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白.用Western印迹初步评价融合蛋白的免疫反应性.结果 融合基因及其原、核表达载体构建成功,融合蛋白以可溶性非包涵体形式表达,相对分子质量为21 000,表达量约占菌体总蛋白的35%.经亲和层析后得到了纯度达97.2%的融合蛋白.Western印迹证实,融合蛋白能与确诊的肺结核患者血清发生特异性免疫应答.结论 成功构建了原核表达载体pET-23b(+).ec,获得了rEC融合蛋白,为rEC融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.
其他文献
随着经济的快速发展，电力网络的建设也上了一个新台阶，作为电网重要组成元件之一的变压器，其数量也在激增。本文对电力安装施工现场中通过对各环节用点情况进行分析与计算等方面
随着经济的发展，国家对电力的需求越来越高，电厂建设越发显得重要，而在电厂建设中的锅炉受热面的安装是关系电厂建设是否能快速、稳定运行的关键工序，本文所叙述的是大型塔式超超
安全生产是建筑施工企业永恒的话题，作为建筑施工安全管理的各个相关主体,应充分认识到施工安全工作任重道远,在我国建筑安全管理的现有水平下,应加强施工单位的安全监督管理
随着经济的发展，建筑电气设计的安全和美观越来越得到人们的喜爱，这也同时反映了我们建筑电气设计单位将要面临更大的挑战。本文结合作者自身的工作经验，对建筑电气设计一些要点
在实际设计过程中，应根据相关规范作科学合理的设计，下面就建筑框架结构设计时常遇到的问题进行分析并探讨具体解决措施。
高层建筑的资金投入相对较多，施工周期长，且混凝土浇筑量大，工程质量及施工安全等方面有它的特殊性，只有搞好高层建筑工程施工的技术管理，才能控制工程的施工质量、进度、成本、安
鉴于保髋手术后的护理将直接影响患者保髋治疗的效果,故从心理治疗,术前适应性锻炼,术后护理包括制动、固定、疼痛、便秘、腹胀等方面探讨保髋手术前后的护理方法.
煤矿机电运输作为矿井生产环节的重要组成部分。它贯穿于生产的各个环节，分布于各硐室的机电运输设备组成了极为复杂的机电运输网络。煤矿机电运输系统是一个复杂的网络系统，采
面对激烈竞争的建筑市场，审核认证对于任何企业来说都不是想当然的，必须具有一定的管理和经济实力为基础。
近几年手足口病在亚太地区的流行大幅上升并伴随严重的中枢神经系统并发症,而针对其主要致病原肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型现在还缺乏有效的预防疫苗和抗病毒制剂.确定它