【摘 要】
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目的研制苯巴比妥单克隆抗体(PBmAb),建立PB血药浓度竞争ELISA监测方法。方法将PB改造成对氨基苯巴比妥(pAPB),用重氮化法合成免疫原BSA-pAPB并免疫Balb/c小鼠;细胞融合技术
【机 构】
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河南科技学院动物科学学院,西北农林科技大学医院,河南省动物免疫学重点实验室
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目的研制苯巴比妥单克隆抗体(PBmAb),建立PB血药浓度竞争ELISA监测方法。方法将PB改造成对氨基苯巴比妥(pAPB),用重氮化法合成免疫原BSA-pAPB并免疫Balb/c小鼠;细胞融合技术筛选PBmAb杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备PBmAb;应用PBmAb研制PB血药浓度监测竞争ELISA试剂盒(PB-Kit),并测定其性能。结果BSA-pAPB偶联成功;筛选出4株杂交瘤细胞,应用其中最好的4E6株制备的PBmAb间接ELISA效价为1∶6·4×105,亲和常数(Ka)为2·08×1010L·moL-1,50%抑制浓度(IC50)为9·84μg·L-1,与巴比妥的交叉反应率(CR)为7·9%,与其他化合物无CR;PB-Kit的检测范围为1·0~128μg·L-1,灵敏度为0·89μg·L-1,检测限为1μg·L-1,血清样添加回收率为94·7%,批内和批间变异系数均<10%;PB-Kit与差示分光光度法(DS)的符合率为100%。结论成功研制出高价、敏感、特异的PBmAb,建立了PB血药浓度竞争ELISA监测方法。
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