【摘 要】
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目的:制备接头蛋白NRBP的兔多克隆抗体,并检测该抗体的效价及特异性.方法:PCR方法以重组质粒PEF-NRBP为模板,获得NRBP全长及NRBP(1 -99Aa)cDNA,构建到原核表达质粒pET -21a及
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目的:制备接头蛋白NRBP的兔多克隆抗体,并检测该抗体的效价及特异性.方法:PCR方法以重组质粒PEF-NRBP为模板,获得NRBP全长及NRBP(1 -99Aa)cDNA,构建到原核表达质粒pET -21a及pGEX - 6P -1中.分别转入大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导表达后,纯化并鉴定表达产物将其免疫家兔,间接ELISA法及免疫印迹等方法鉴定抗体.结果:成功获得人NRBP的cDNA,构建得到相关的原核表达质粒,在大肠杆菌中可诱导性高表达,纯化后蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经ELISA检测为阳性结果,4只免疫家兔的抗体效价约为1∶5200～1∶40000.Western印迹结果显示,该抗体可特异性的识别真核细胞外源性及内源性约60kDa的NRBP蛋白,并且具有较强免疫沉淀能力.结论:NRBP多克隆抗体具有很好的特异性和敏感性,该抗体的成功制备为进一步研究NRBP的功能提供了重要工具.
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