PTEN基因真核表达载体的构建及在COS-7细胞株中的表达

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目的构建人PTEN基因的真核表达载体并在COS-7细胞中高效表达。方法从人喉粘膜组织中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到PTEN全基因。克隆入PTEM-Teasy载体上,经过PCR、酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析。然后将所获得的基因定向克隆入PCI—neo载体中构建表达载体。并将其转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果反转录PCR扩增后的产物,在约1.4kb处可以看见特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PIEN基因序列相同。PCI-PTEN真核载体转染COS-7细胞后的We
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