【摘 要】
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目的建立快速分离人皮肤成纤维细胞的方法,并探讨成纤维细胞在成脂、成骨、成软骨和成神经的多向分化潜能。方法利用组织块培养法分离人体皮肤成纤维细胞,通过形态学观察、流
【机 构】
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聊城大学/聊城市人民医院组织工程与再生医学研究所; 山东美加赛培生物科技有限公司; 山东大学第二医院转化医学研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81571241）;山东省重点研发计划（公益类专项2017GSF18104）
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目的建立快速分离人皮肤成纤维细胞的方法,并探讨成纤维细胞在成脂、成骨、成软骨和成神经的多向分化潜能。方法利用组织块培养法分离人体皮肤成纤维细胞,通过形态学观察、流式分析、Vimentin蛋白染色鉴定成纤维细胞;再利用生长曲线、核型分析、线粒体染色分析不同传代细胞的增殖速度,线粒体及染色体形态的改变;最后进行成纤维细胞成脂、成骨、成软骨和成神经的诱导分化实验,鉴定其多向分化潜能。两代细胞增殖速度及线料体相对量的比较采用t检验统计分析。结?果分离的皮肤成纤维细胞呈典型梭状及多角形;高表达细胞表面标记物CD90 (NCF1,NCF2占比分别为99.9﹪,98.7﹪)和CD73 (NCF1,NCF2占比分别为98.2﹪,85.6﹪),但极少表达造血干细胞标记物CD34 (NCF1,NCF2占比分别为1.8﹪,2.6﹪);细胞Vimentin蛋白表达呈阳性,阳性率为100﹪;对细胞生长曲线进行分析,表明分离后不同代次细胞增殖差异无统计学意义(t=1.586,P=0.1567);线粒体相对含量统计分析,同一株细胞系第5代(相对荧光强度值:6876±577.8)与第10代(相对荧光强度值:7371±471.9)之间的差异无统计学意义(t=0.664,P=0.543);核型分析分别显示传代后保持染色体数目为正常46条且形态无明显异常;经诱导后成纤维细胞可向成脂、成骨、成软骨和类神经分化。结论利用组织块培养法分离出的人体皮肤成纤维细胞状态稳定,增殖能力强,具有成脂、成骨、成软骨和成神经多向分化诱导潜能,为细胞移植修复骨损伤、软骨损伤和神经损伤性疾病的临床研究提供细胞来源及实验依据。
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