【摘 要】
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运用毕赤氏酵母对猪源重组氨基酰化酶Ⅰ(pACY1)进行了表达,并对其酶学参数进行了测定.构建毕赤氏酵母工程菌GS115-pacy1,通过甲醇诱导表达后,进行了Phenyl-Sepharose及Q-Seph
【机 构】
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湖北工业大学生物工程学院,湖北武汉 430068
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运用毕赤氏酵母对猪源重组氨基酰化酶Ⅰ(pACY1)进行了表达,并对其酶学参数进行了测定.构建毕赤氏酵母工程菌GS115-pacy1,通过甲醇诱导表达后,进行了Phenyl-Sepharose及Q-Sepharose两步色谱纯化;对纯化后重组pACY1的动力学参数进行测定.重组pACY1纯化后呈均一性,其纯度为98.6%;酶学参数测定结果表明,重组酶的比活力(Vmax)为280U/mg,米氏常数(Km)为0.91mM,接近天然酶对应的287U/mg 和0.84mM;而酵母重组酶 Tm 值为74℃,高于天然酶的70℃.毕赤氏酵母表达重组pACY1的酶活性与天然酶相当,且其热稳定性优于天然酶.这为氨基酸拆分产业提供了更加优质而丰富的酶制剂.
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