氯化锌对体外培养人晶状体上皮细胞生长的抑制作用及其机制

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背景

锌离子有抑制肿瘤细胞增生、诱导癌细胞凋亡的作用,眼科常用于结膜炎和沙眼治疗的局部用药。迄今为止,关于锌离子对人晶状体上皮细胞(LECs)增生的研究较少。

目的

研究氯化锌(ZnCl2)对人LECs细胞株HLEB-3增生的影响及其作用机制。

方法

对HLEB-3进行常规细胞培养和传代,在培养基中加入不同质量浓度的ZnCl2,使终质量浓度分别为5、10、20、40和80 mg/L,继续培养细胞24、48和72 h,未添加ZnCl2的细胞作为对照组。采用MTT法检测各组培养细胞的活力;采用JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;采用流式细胞仪检测不同细胞周期的细胞比例;采用实时荧光定量PCR法和ELISA法分别检测细胞中bcl-2 mRNA及其蛋白的表达量,并对各组检测结果进行比较。

结果

对照组培养的细胞呈镶嵌多边形,排列紧密;不同质量浓度ZnCl2组细胞数目均减少,形态不规则,细胞排列紊乱。随着ZnCl2质量浓度的增加和ZnCl2作用时间的延长,细胞生存率均明显降低,总体比较差异均有统计学意义(F质量浓度=173.949,P=0.000;F时间=16.997,P=0.000)。对照组细胞膜呈橙红色荧光,随着ZnCl2质量浓度的增加,不同质量浓度ZnCl2处理后橙红色荧光逐渐减弱,绿色荧光逐渐增强。不同质量浓度ZnCl2组处于S期和G2/M期的细胞比例明显多于对照组,而G0/G1期的细胞明显少于对照组,总体差异均有统计学意义(S期:F=15.594,P=0.000;G2/M期:F=12.792,P=0.000;G0/G1期:F=43.366,P=0.000)。对照组细胞中bcl-2 mRNA的相对表达量为1.00±0.00,而5、10、20、40和80mg/L ZnCl2组bcl-2 mRNA的相对表达量分别降至0.32±0.13、0.07±0.03、0.14±0.05、0.01±0.00和0.12±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.01);对照组细胞中bcl-2蛋白的表达水平为(138.57±32.80) pg/mg,5、10、20、40和80 mg/L ZnCl2组分别为(79.20±5.70)、(79.95±6.21)、(61.02±10.74)、(72.05±11.61)和(55.97±10.53) pg/mg,均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。

结论

ZnCl2可使HLEB-3细胞阻滞于G2/M期,从而抑制细胞的增生,其作用机制可能与ZnCl2引起△Ψm下降和下调bcl-2在细胞中的表达有关。

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