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以2岁奶牛输卵管为材料，用胰酶消化法分离得到了牛输卵管上皮细胞。输卵管上皮细胞在DMEM／F12培养基中生长良好。用一代牛输卵管上皮细胞为靶细胞，对其进行了电穿孔转染，转染对象是分子大小为31085bp的以β-casein启动子为基础的含有人胶原蛋白cDNA基因和EGFP、Neor双标记基因的质粒。电穿孔试验发现，牛输卵管上皮细胞在低渗缓冲液中电转染可以获得阳性转染子，其中以90mOsm／kg为最佳。电压以800V为好，电压高和低都不利于电穿孔的成功。成功转染的细胞用800mg/L G418进行筛选，在1