论文部分内容阅读
目的检测甲基苯丙胺依赖大鼠和健康大鼠血清外泌体中微小RNA（miR）-181a-5p的表达,并对miR-181a-5p进行靶基因预测及相关生物信息学分析。方法用甲基苯丙胺复制大鼠条件性位置偏爱（CPP）模型。按照体重将雄性SD大鼠随机分为2组（每组10只）:正常组（0.9%NaCl）,实验组(2mg·kg-1甲基苯丙胺)。实验组上午8:00皮下注射甲基苯丙胺,下午16:00皮下注射0.9%NaCl溶液,连续4 d。正常组同时皮下注射等体积0.9%NaCl溶液。实验组与正常组上午处置后,立即置于白箱训练1 h;下午皮下注射0.9%NaCl溶液后,立即置于黑箱训练1 h,连续训练4 d。在末次处置1 d后,进行位置偏爱测定,记录大鼠15 min内在白箱中停留时间及运动路程。用RT-qPCR技术检测大鼠血清外泌体中miR-181a-5p的表达水平;以Target Scan、miRanda及miRBD预测miR-181a-5p靶基因;用DAVID数据库对其靶基因进行功能聚类分析（GO）和生物通路（KEGG pathways）分析;以STRING在线分析软件对其靶基因蛋白进行相互作用分析。结果 CPP训练后,2组在白箱中停留时间（s）及运动路程（cm）:正常组分别为202.67±28.24,3349.26±412.28;实验组分别为460.47±66.71,4475.97±585.74。实验组与正常组比较,差异均有统计学意义（均P<0.01）。正常组、实验组血清外泌体中miR-181a-5p表达分别为3.39±1.79,10.23±4.32,组间差异有统计学意义（P<0.01）。预测得到miR-181a-5p靶基因108个,其功能主要富集于神经元的生成和分化、基因表达调控及谷氨酸转运等生物学过程,涉及内质网蛋白加工信号通路。miR-181a-5p靶基因编码蛋白之间存在复杂的相互作用,其中RAD23B、PRKCD、MAP2K1、NCBP1、GABRA1等在蛋白互作网络中具有核心地位。结论miR-181a-5p可能通过调控基因表达及谷氨酸转运等生物过程,作用于内质网蛋白加工信号通路,进而调节下游靶蛋白参与甲基苯丙胺成瘾的发生过程。