探讨内吗啡肽(EMs)对糖基化终末产物(AGEs)培养条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)合成分泌一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素1(ET–1)的影响。
方法体外制备AGEs修饰的牛血清白蛋白(AGEs–BSA);分别用AGEs–BSA、EMs (1×10–5、1×10–6、1×10–7、1×10–8 mol/L EM1或EM2)+AGEs–BSA及EMs (1×10–5 mol/L EM1或EM2)+纳洛酮+AGEs–BSA共同干预HUVEC,同时以只加BSA的HUVEC作为阴性对照。噻唑蓝(MTT)法检测各组HUVEC存活率;放射免疫法检测各组NO、eNOS水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定各组ET–1表达量;实时荧光定量聚合酶链反应(RT–PCR)法检测各组eNOS、ET–1 mRNA的表达。采用单因素方差分析及t检验进行数据统计。
结果与AGEs–BSA组相比,1×10–5mol/L EM1干预组HUVEC存活率增加,NO分泌量减少[分别为0.89±0.05 vs 0.67±0.02和(14.8±1.4) vs (23.0±0.7) μmol/L,t值分别为9.86、13.18,均P<0.05], ET–1产生及其mRNA表达降低[分别为(0.85±0.01) vs (0.99±0.01) μg/L和10.6±0.7 vs 25.6±1.6,t值分别为31.36、50.18,均P<0.05],eNOS活性及其mRNA表达增加[分别为(2.53±0.20) vs (0.61±0.09) U/ml和0.35±0.00 vs 0.05±0.00,t值分别为21.50、16.80,均P<0.05],EM1其他浓度组和EM2各浓度组上述各指标与AGEs–BSA组比较结果相似,差异亦均有统计学意义(t值为2.24~102.4,均P<0.05);纳洛酮组上述指标与AGEs–BSA组差异无统计学意义(t值为0.56~2.05,均P>0.05),而与各浓度EM1或EM2干预组差异有统计学意义(t值为2.24~64.96,均P<0.05)。
结论EMs可提高AGEs–BSA条件下HUVEC的存活率,降低NO、ET–1浓度,提高eNOS浓度;纳洛酮可阻断EMs的上述作用,提示EMs是通过μ阿片受体发挥作用的。