探讨肝星状细胞(HSC)特异性肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)基因敲除(IRE1αHSC-/-)对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化的影响。
方法杂交获得IRE1αfl/fl及IRE1αfl/fl/血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)Cre小鼠(美国梅奥诊所胃肠肝病实验中心惠赠)，腹腔注射他莫昔芬(Tamoxifen)诱导PDGFRβCre活化并构建IRE1αHSC-/-小鼠，设为实验组；将IRE1αfl/fl小鼠设为WT组；两组分别予以腹腔注射CCl4或等体积橄榄油(Olive Oil)，根据不同处理分组如下：野生型对照组(WT-O.Oil，n＝5)、基因敲除对照组(IRE1αHSC-/--O.Oil，n＝5)、野生型实验组(WT-CCl4，n＝5)、基因敲除实验组(IRE1αHSC-/--CCl4，n＝5)，6周后处死，获取肝脏组织行苏木精-伊红(HE)染色及天狼猩红染色。蛋白质印迹法(Western blot)及免疫荧光染色比较各组肝脏中IRE1α、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、纤连蛋白(Fibronectin)、PDGFRα、结蛋白(Desmin)蛋白及荧光表达水平；组间比较均采用单因素方差分析。
结果与WT比较，IRE1αHSC-/-可以减轻CCl4诱导生成的肝脏大量炎性细胞以及胶原蛋白沉积[(1.56±0.45)%比(2.43±0.49)%，F＝50.300，P<0.01]。Western blot结果显示，IRE1αHSC-/--CCl4组中α-SMA、Fibronectin蛋白表达明显低于WT-CCl4组(3.11±0.88比5.49±1.85、3.21±0.79比5.65±1.97，F＝17.900、18.780，P<0.05)；免疫荧光结果示IRE1αHSC-/--CCl4组中α-SMA、Collagen Ⅰ及Desmin荧光相对表达量明显低于WT-CCl4组，差异有统计学意义[(13.19±3.52)%比(17.91±4.46)%、(18.66±6.73)%比(22.21±7.92)%、(8.85±2.11)%比(11.87±2.07)%，F＝100.300、74.690、71.270，P<0.05]。
结论HSC特异性IRE1α基因敲除能够通过抑制HSC活化，减少CCl4诱导的小鼠肝脏中胶原纤维沉积，缓解肝纤维化进程。