【摘 要】
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目的:建立一种简便、经济、高效分离原代大鼠肝细胞的方法,适用于体外药物代谢研究。方法:改进方法采用低浓度胶原酶“软消化”方式,并增加预孵育过程。比较传统分离方法和改
【机 构】
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军事医学科学院野战输血研究所; 军事医学科学院野战输血研究所 北京100850; 北京100850;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30371669)
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目的:建立一种简便、经济、高效分离原代大鼠肝细胞的方法,适用于体外药物代谢研究。方法:改进方法采用低浓度胶原酶“软消化”方式,并增加预孵育过程。比较传统分离方法和改进方法在细胞产量、活率以及胶原酶用量上的差异,并将改进方法所得细胞分别与CYP2C、CYP2E、CYP3A典型底物及新药17-AAG共孵育,检测CYP450酶活性及其实际应用价值。结果:改进方法分离的肝细胞在细胞产量尤其是活率上明显高于传统方法,胶原酶用量大大降低,典型底物甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和睾酮经细胞代谢检测到典型羟基化代谢产物,17-AAG经孵育后与体内样品检测结果一致。结论:改进方法可明显提高细胞产量和活率,所得肝细胞具备良好的CYP450酶活性,适用于体外代谢研究,预测药物体内过程。
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