【摘 要】
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目的 建立快速、简便诊断巨片形吸虫病的胶体金免疫层析试条方法.方法 提取巨片形吸虫总RNA,通过RT-PCR获得FgCL1-YN基因片段,并克隆入pET28a(+)表达载体,异丙基-β-D-硫代半
【机 构】
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中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,卫生部寄生虫病病原与媒介生物学重点实验室心,世界卫生组织热带病合作中心,上海 200025;大理州血吸虫病防治研究所,大理,671000;益思美诠生物科技(上海
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目的 建立快速、简便诊断巨片形吸虫病的胶体金免疫层析试条方法.方法 提取巨片形吸虫总RNA,通过RT-PCR获得FgCL1-YN基因片段,并克隆入pET28a(+)表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白(rFgCL1-YN);将rFgCL1-YN和羊抗鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜的适宜位置作为检测带和质控带,以胶体金标记抗人IgG4抗体的鼠单抗作为检测试剂,制备检测特异性IgG4型抗体的免疫层析试条.用该试条检测巨片形吸虫病患者(30份)、日本血吸虫病患者(15份)以及健康人(32份)血清,评价其诊断价值,同时用ELISA法进行平行检测作为对照.结果 试条检测法的敏感性为100％(30/30),特异性为97.9％(46/47),总体符合率为98.7％(76/77).ELISA法检测的敏感性、特异性和总体符合率分别100％(30/30)、100％(47/47)和100％(77/77).试条法与ELISA法的敏感性、特异性和总体符合率,经四格表确切概率法检验,P值分别为1、0.5和0.5,全部大干0.05.显示,试条法与ELISA法检测巨片形吸虫病患者血清的结果高度一致.另外,试条法的检测时间为10 min,血清用量低于10μL,且具较高的敏感度.结论 以rFgCL1-YN建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测巨片形吸虫病具有较高的诊断价值.
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