【摘 要】
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甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOT14,THRSP)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作
【机 构】
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河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放试验室,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
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甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOT14,THRSP)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用.为进一步研究猪SPOT14基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOT14( GenBank登录号:JF_951726)的ORF片段与表达载体pET-28α(+)进行重组,获得的重组子pET-28α(+)-S14,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS-PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1 mmol/L IPTG诱导5h.将获得的包涵体用6xHis Ni-NTA纯化柱纯化后,采用Western blot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达.重组质粒pET-28α(+)-S14在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地得到了表达,不仅为SPOT14基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料.
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