长白猪IL-4基因克隆及真核表达载体的构建

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将长白猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24h后,提取其总RNA,应用RT-PCR技术扩增白细胞介素-4(IL-4)cDNA,克隆到pMD19-T载体并测序。将构建好的载体双酶切并回收目的片段与pcDNA3.1(+)载体连接并转化入Top10中构建真核表达载体,真核表达载体经双酶切及测序结果表明:克隆的IL-4cDNA全长为411个碱基,其中ORF为402个碱基,编码133个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-4比对同源性为100%,从而证实成功构建了长白猪IL-4cDNA真核表达载体。
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