构建cRNA作为标准曲线的实时RT-PCR检测方法

来源 :临床检验杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wsl526

【摘要】

：

目的建立一种新的基于LightCyclerTM技术,并通过构建cRNA标准曲线来对目的基因进行定量实时RT-PCR的检测方法.方法以T7 RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的cRNA作为标准品,

【作者】

：

蔡刚李闻捷丁健华付传刚沈茜

【机构】

：

第二军医大学附属长海医院,第二军医大学附属长海医院

【出处】

：

临床检验杂志

【发表日期】

：

2004年3期

【关键词】

：

cRNA 标准曲线实时RT-PCR检测 mRNA定量 real-time PCR mRNA quantification cRNA standards

【基金项目】

：

军队科研项目

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目的建立一种新的基于LightCyclerTM技术,并通过构建cRNA标准曲线来对目的基因进行定量实时RT-PCR的检测方法.方法以T7 RNA聚合酶体外转录合成带有目的片段的cRNA作为标准品,并与样本同时进行反转录和PCR扩增,用此方法来检测目的基因在结直肠组织中的表达.结果采用cRNA标准品制作的标准曲线具有较好的线性关系(r＞0.99),而且在每次实验中都能取得较好的扩增效率,CEA与GAPDH的扩增效率分别大于88.7%和87.4%.结论此方法能较为准确的对组织中的目的基因表达进行定量检测.

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