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采用柱层析技术对盐析后的纳豆激酶发酵液进行分离纯化，以确定层析分离纳豆激酶的技术参数。对比了Sephadex G-50及Sephadex G-7凝胶层析分离纳豆激酶的效果，并进行了不同pH值条件下的层析效果分析。结果表明，在pH为6．4时，经Sephadex G-75凝胶层析及SP Sepharose FF离子交换层析后，能够得到较高纯度的纳豆激酶，使纳豆激酶纯化了9．2倍，回收率为51．5％。SDS—PAGE电泳显示所得纳豆激酶为单一蛋白带，其分子质量为28ku。