【摘 要】
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实验成功地构建了毕赤酵母(Pichia pastoris)表达质粒pPICZA-Mn-sod,质粒线性化后通过电激法导入毕赤酵母GS115,抗生素zeocin抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株.PCR鉴定及Mut+
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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实验成功地构建了毕赤酵母(Pichia pastoris)表达质粒pPICZA-Mn-sod,质粒线性化后通过电激法导入毕赤酵母GS115,抗生素zeocin抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株.PCR鉴定及Mut+表型分析表明,目标基因已经重组到宿主基因组染色体上;0.5%甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示,表达蛋白的相对分子量约为23 kD,活性电泳出现明显活性条带;酶活性测定显示,重组菌株SOD活性比对照提高5倍左右;氯仿-乙醇(3:5/V:V)和KCN(5 mmol几)抑制反应进一步证明,所表达的
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