【摘 要】
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为建立一种快速、特异的鸭乙型肝炎病毒(DHBV)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,设计一对引物扩增DHBV基因组,将其克隆到pMD-18-T载体上,然后以该重组质粒为模板,选择DHBV S
【机 构】
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河南农业大学禽病研究所; 郑州大学医药科学研究院;
【基金项目】
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国家新药创制重大专项项目(2009ZX09103-110)
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为建立一种快速、特异的鸭乙型肝炎病毒(DHBV)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,设计一对引物扩增DHBV基因组,将其克隆到pMD-18-T载体上,然后以该重组质粒为模板,选择DHBV S基因保守序列设计一对定量PCR引物,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并用所建立的方法评价拉米夫定和阿德福韦酯在鸭体内对DHBV-DNA复制的抑制效果。结果表明:该方法能特异性检测到DHBV;相关系数为1.00,扩增效率为105%;敏感度高,最低检测限为70个拷贝。拉米夫定和阿德福韦酯对DHBV感染后鸭外周血DHBV-DNA的复制均有很好的抑制效果,但停药后会出现轻度"反跳"现象。建立的DHBV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,可用于抗HBV药物的评价。
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