【摘 要】
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目的:研究hes家族bHLH转录因子4(HES4)与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性作用.方法:构建Lenti-pCDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感
【机 构】
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中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所),实验血液学国家重点实验室,国家血液病临床研究中心,天津300020;南开大学生命科学学院 天津300071;天津医科大学基础医学科学院 天津30
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目的:研究hes家族bHLH转录因子4(HES4)与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性作用.方法:构建Lenti-pCDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感染Jurkat细胞,感染空载体Lenti-pCDH-puro为对照组,puromycin筛选阳性细胞,Realtime-PCR检测转录水平HES4过表达情况,CCK8法检测Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol ·L-1;设计3对针对于HES4的特异sgRNA序列,构建LentiGuide-sgRNAl-puro、LentiGuide-sgRNA2-Puro、LentiGuide-sgRNA3-puro质粒,LentiGuide-puro空载体为对照组,包装慢病毒感染Jurkat细胞,puromycin筛选,提取基因组DNA,PCR扩增sgRNA的靶序列,一代测序检测HES4的敲除效率,CCK8法检测敲除HES4后Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol·L-1.结果:与对照组相比,HES4在Jurkat中过表达(2.37±0.09)倍(P＜ 0.001),在Ara-C为1 nmol·L-1、100 nmol·L-1浓度下,过表达HES4使Jurkat对Ara-C的药物敏感性降低(P值分别小于0.01、0.05);sgRNA1、sgRNA2、sgRNA 3敲除分值分别为83、71、63,其中sgRNA1的敲除效果最佳,在Ara-C为1000 nmol·L-1浓度下,敲除HES4促进Jurkat对Ara-C的敏感性(P＜0.05),3条sgRNAs之间无明显区别(P＞0.05).结论:HES4抑制T-ALL细胞系Jurkat对Ara-C的敏感性,为T-ALL化疗耐受的机制研究提供指导.
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