【摘 要】
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目的 探讨反义肽核酸(asPNA)对大鼠甲状腺细胞的细胞膜表面促甲状腺激素受体(TSHR)表达的影响.方法 设计两种与TSHR mRNA不同片段互补的asPNA,分别为核定位信号-asPNA 1(NLS-asPNA1)和NLS-asPNA2,另外合成一段非相关的干扰肽核酸(NLS-scrPNA)序列,用荧光显微镜观察NLS-asPNA能否进入细胞,采用噻唑蓝法检测asPNA对细胞是否具有毒性作用,
【机 构】
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300457,天健生物制药天津有限公司,300070,天津医科大学病理生理教研室,300070,天津医科大学病理生理教研室,300070,天津医科大学病理生理教研室,300070,天津医科大学寄生虫学
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目的 探讨反义肽核酸(asPNA)对大鼠甲状腺细胞的细胞膜表面促甲状腺激素受体(TSHR)表达的影响.方法 设计两种与TSHR mRNA不同片段互补的asPNA,分别为核定位信号-asPNA 1(NLS-asPNA1)和NLS-asPNA2,另外合成一段非相关的干扰肽核酸(NLS-scrPNA)序列,用荧光显微镜观察NLS-asPNA能否进入细胞,采用噻唑蓝法检测asPNA对细胞是否具有毒性作用,然后用实时定量RT-PCR检测NLS-asPNA对TSHR mRNA表达的影响.结果 荧光显微镜观察发现,asPNA可以进入到细胞中去.噻唑蓝法检测发现asPNA对细胞没有毒性作用.实时定量RT-PCR结果显示,NLS-asPNA1和NLS-asPNA2可以抑制TSHR mRNA表达,表现为随着NLS-asPNA与细胞培养时间的延长,TSHR cDNA的拷贝数逐渐下降,且呈现时间依赖性,而NLS-scrPNA对TSHRmRNA的表达没有明显的影响.结论 NLS-asPNA可以进入到细胞中去,并且能够下调TSHRmRNA的表达。
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