【摘 要】
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①目的以PCR法在菌液中快速筛选重组克隆.②方法提取小鼠巨噬细胞总RNA,反转录PCR(RT-PCR)获得肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因片段,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌JM109.在
【机 构】
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青岛大学医学院附属医院普外科,青岛海慈医院检验科,青岛大学医学院附属医院分子生物学中心实验室
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①目的以PCR法在菌液中快速筛选重组克隆.②方法提取小鼠巨噬细胞总RNA,反转录PCR(RT-PCR)获得肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因片段,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌JM109.在大肠杆菌培养中的不同时间取样测定大肠杆菌A600值及计数.以不同数量的大肠杆菌为模板进行系列PCR扩增,获得适宜PCR扩增条件的大肠杆菌数.③结果以菌液为模板进行PCR能够快速筛选重组体,大肠杆菌模板数在125～250个范围内,PCR对阳性克隆的扩增可获得良好结果;获得常规培养条件下转化大肠杆菌的生长曲线,A600
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