【摘 要】
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目的 探讨叉头状螺旋转录因子3基因(Forkhead box P3,FOXP3)的短发夹RNA(shRNA)对人胶质瘤细胞系U87和LN229增殖能力及凋亡的影响.方法 用脂质体法将4个含有靶向FOXP3的shRNA
【机 构】
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300070,天津医科大学研究生院天津市环湖医院检验科;天津市神经外科研究所天津市脑血管与神经变性病重点实验室;天津市第一中心医院;
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目的 探讨叉头状螺旋转录因子3基因(Forkhead box P3,FOXP3)的短发夹RNA(shRNA)对人胶质瘤细胞系U87和LN229增殖能力及凋亡的影响.方法 用脂质体法将4个含有靶向FOXP3的shRNA序列(shRNA1 ～4)和1个含有shRNA无意义随机阴性对照序列(neg-shRNA)的质粒转染入人胶质瘤U87细胞和LN229细胞;应用Western blot检测转染后FOXP3蛋白的表达情况筛选出最有效的一个shRNA干扰质粒;应用流式细胞术、CCK-8法检测转染后U87细胞和LN229细胞的凋亡和增殖活性的变化.结果 转染72 h后,Western blot结果显示空白对照组、shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4组和neg-shRNA组中FOXP3蛋白的表达受抑制最明显的是shRNA-1组.CCK-8结果显示转染72 h后,shRNA-1转染组U87细胞和LN229细胞增殖活性分别为(122.00±4.32)％、(118.36±2.49)％,与neg-shRNA组(98.55±4.34)％、(99.87±2.17)％和空白对照组100％相比均显著升高(P＜0.05);流式细胞术结果显示转染72 h后,shRNA-1转染的U87细胞和LN229细胞凋亡率分别为(7.03±3.36)％和(9.40±2.51)％,neg-shRNA转染U87细胞和LN229细胞的凋亡率分别为(17.70±4.39)％和(22.63±1.86)％,在U87和LN229细胞中空白对照组凋亡率分别为(16.57±2.30)％和(21.67±1.93)％,两种细胞的凋亡率在shRNA-1组与neg-shRNA组和空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向FOXP3基因的shRNA能够有效抑制该基因表达,抑制胶质瘤细胞的凋亡,促进细胞增殖.
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