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【摘 要】 目的：检测Notch信号通路在乳腺癌和增生性中的表达，探讨Notch1、JAG1与乳腺癌相关临床指标的关系。方法：选取乳腺癌组织（50例）和得癌旁正常乳腺组织（20例）进行对照研究，采用RP-PCR方法对Notch信号中的Notch1和JAG1在乳腺癌和增生性中的表达情况进行检测。结果：LN分期和乳腺癌病理学分级比较差异均具有显著性（P<0.05）；TNM分期中Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期的比较差异具有显著性（P<0.05），Ⅰ期与Ⅲ期比较差异并不显著（P>0.05）。结论：Notch信号相关通路在乳腺癌和增生性中的作用并不相同，Notch1和JAG1的异常表达均与乳腺癌存在内在关联。
【关键词】 Notch 乳腺癌 增生性病变 表达
【Abstract】 Objective： To investigate the expression of Notch signaling pathway in breast cancer and hyperplasia， and to investigate the relationship between JAG1 and Notch1 and clinical indicators of breast cancer.. Methods： a total of breast carcinoma （50 cases） and to adjacent normal breast tissues （20 cases） were studied， using rp-pcr method was used to detect the expression of Notch signaling in the Notch1 and Jag1 in breast carcinoma and hyperplastic. Results： ln staging and breast cancer pathological grade difference is significant （P < 0.05）； TNM staging of stage I and II， phase II and phase III of the difference is significant （P < 0.05）， phase I and III， the difference was not significant （P > 0.05）. Conclusions： the role of Notch signaling pathway in breast cancer and hyperplasia was different， and the abnormal expression of JAG1 and Notch1 were associated with breast cancer.
【Keywords】 Notch； breast cancer； proliferative lesion； expression
本研究采用One-step RP-PCR方法对Notch信号中的Notch1及JAG1在乳腺癌和增生性中的表达情况进行检测，以验证Notch信号致癌的可能机制和作用，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
收集我院2013年2至2014年12月期间50例经病理报告确诊为乳腺浸润导管癌的新鲜癌标本，并获得癌旁正常乳腺组织20例。本组患者均为女性，年龄范围为35～75岁，平均为（51.2±3.7）岁，均符合WHO关于乳腺癌的相关诊断标准[1]。抗体为Notch1和JAG1，分别来源于鼠抗人和兔抗人，工作浓度分别为1：50、1：300。
1.2 方法
1.2.1 病理学分析
对病变组（50例）和对照组（20例）病理进行常规HE染色，结合患者基本情况及免疫组化染色结果，采用One-step RP-PCR方法对病例Notch1及JAG1的表达情况进行检测，并以SP法对病理样本进行检测，根据腺管和腺体形成、核多形性、核分裂计数，对乳腺癌进行组织学分级；根据组织病理学分级标准，明确乳腺增生性病变分期[2]。
1.2.2 一步法RP-PCR和SP法检测
以Trizol法提取新鲜组织和病理组织标本的RNA，对其产率和纯度进行鉴定，以一步法RP-PCR分别扩增Notch1和JAG1基因，二者逆转录、PCR起始、循环等反应条件均相同，分别为50℃（30min）、95℃（15min）、94-60-72℃（30s、45s、60s，共35个循环），并将所获PCR产物（2.5μL）置于琼脂糖凝胶中电泳，电压设为100V，时间为30min，电泳结束后，采用图像分析系统对凝胶进行拍照分析。以SP法对Notch1和JAG1蛋白的表达进行检测，取各标本并对每例连续切片6张，厚度为5μm，经免疫组织学处理置入37℃烘箱内过夜备用；检测Notch1和JAG1蛋白，以小鼠胰腺、人肺癌和人乳腺癌标本为阳性对照，加Notch1和JAG1第1抗体，于湿盒内4℃冰箱过夜；染色结果判断参照阳性细胞百分比，以≤10%为无着色，分级为“-”，以11～50%为弱（淡黄），分级为“+”，以51～75%为中（棕黄），分级为“++”，以76～100%为强（棕褐），分级为“+++”[3]。
1.3 统计学分析
以SPSS12.5软件包对所获数据进行统计分析，以百分率（%）表示Notch1和JAG1蛋白表达，采用检验，标准以P<0.05为差异具有显著性。
2 结果
研究结果显示，LN分期N0期Notch1标准化系数中位数为0.58，N1期为1.05，比较差异具有显著性（P<0.05）；TNM分期Ⅰ期Notch1标准化系数中位数为0.57，Ⅱ期为1.05，Ⅲ期为0.59，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期的比较差异具有显著性（P<0.05），Ⅰ期与Ⅲ期比较差异并不显著（P>0.05）；乳腺癌病理学分级Ⅰ期Notch1标准化系数中位数为0.55，Ⅱ期为0.83，Ⅲ期为1.05，组间比较差异均具有显著性（P<0.05）。Notch1和JAG1表达率与各病理指标的关系如表1。
3 讨论
Notch信号通路由Notch受体、配体及CSA DNA结合蛋白等构成，可在多个物种中表达，其对细胞生长发育、分化增殖以及凋亡等会产生决定性的影响，相关体外和动物实验均已证实，活化的Notch信号可促使正常细胞转化为恶性细胞，这种异常表达情况在乳腺癌、血液系统肿瘤等实体瘤中均有发现，就乳腺癌而言，相关通路在其形成、发生和发展过程中产生重要影响[4]。
本次研究结果显示，LN分期和乳腺癌病理学分级比较差异均具有显著性（P<0.05）；TNM分期中Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期的比较差异具有显著性（P<0.05），Ⅰ期与Ⅲ期比较差异并不显著（P>0.05）。结合Notch1、JAG1表达率与各病理指标的关系可以得出，Notch信号相关通路在乳腺癌和增生性中的作用并不相同，Notch1和JAG1的异常表达均与乳腺癌存在内在关联，明确Notch信号相关通路的表达情况，有助于进一步探索Notch基因的表达与乳腺癌发生、发展的关系。
参考文献
[1]李兵，谢晓冬.乳腺癌相关信号转导通路的研究进展[J].临床肿瘤学杂志，2010，10（3）：277-279.
[2]万国兴，李锋，孙建平，等.miRNA-34a、Notch1与乳腺癌发生、发展的研究进展[J].临床与实验病理学杂志，2013，10（3）：1113-1115.
[3]刘兆国，朱智杰，周梁，等.Notch信号通路与肿瘤研究[J].中国药理学通报，2012，15（8）：1045-1048.
[4]裘铠杰，胡彦华，吴德全.Notch信号通路与肿瘤侵袭、转移的研究进展[J].胃肠病学和肝病学杂志，2014，11（3）：1362-1364.
【关键词】 Notch 乳腺癌 增生性病变 表达
【Abstract】 Objective： To investigate the expression of Notch signaling pathway in breast cancer and hyperplasia， and to investigate the relationship between JAG1 and Notch1 and clinical indicators of breast cancer.. Methods： a total of breast carcinoma （50 cases） and to adjacent normal breast tissues （20 cases） were studied， using rp-pcr method was used to detect the expression of Notch signaling in the Notch1 and Jag1 in breast carcinoma and hyperplastic. Results： ln staging and breast cancer pathological grade difference is significant （P < 0.05）； TNM staging of stage I and II， phase II and phase III of the difference is significant （P < 0.05）， phase I and III， the difference was not significant （P > 0.05）. Conclusions： the role of Notch signaling pathway in breast cancer and hyperplasia was different， and the abnormal expression of JAG1 and Notch1 were associated with breast cancer.
【Keywords】 Notch； breast cancer； proliferative lesion； expression
本研究采用One-step RP-PCR方法对Notch信号中的Notch1及JAG1在乳腺癌和增生性中的表达情况进行检测，以验证Notch信号致癌的可能机制和作用，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
收集我院2013年2至2014年12月期间50例经病理报告确诊为乳腺浸润导管癌的新鲜癌标本，并获得癌旁正常乳腺组织20例。本组患者均为女性，年龄范围为35～75岁，平均为（51.2±3.7）岁，均符合WHO关于乳腺癌的相关诊断标准[1]。抗体为Notch1和JAG1，分别来源于鼠抗人和兔抗人，工作浓度分别为1：50、1：300。
1.2 方法
1.2.1 病理学分析
对病变组（50例）和对照组（20例）病理进行常规HE染色，结合患者基本情况及免疫组化染色结果，采用One-step RP-PCR方法对病例Notch1及JAG1的表达情况进行检测，并以SP法对病理样本进行检测，根据腺管和腺体形成、核多形性、核分裂计数，对乳腺癌进行组织学分级；根据组织病理学分级标准，明确乳腺增生性病变分期[2]。
1.2.2 一步法RP-PCR和SP法检测
以Trizol法提取新鲜组织和病理组织标本的RNA，对其产率和纯度进行鉴定，以一步法RP-PCR分别扩增Notch1和JAG1基因，二者逆转录、PCR起始、循环等反应条件均相同，分别为50℃（30min）、95℃（15min）、94-60-72℃（30s、45s、60s，共35个循环），并将所获PCR产物（2.5μL）置于琼脂糖凝胶中电泳，电压设为100V，时间为30min，电泳结束后，采用图像分析系统对凝胶进行拍照分析。以SP法对Notch1和JAG1蛋白的表达进行检测，取各标本并对每例连续切片6张，厚度为5μm，经免疫组织学处理置入37℃烘箱内过夜备用；检测Notch1和JAG1蛋白，以小鼠胰腺、人肺癌和人乳腺癌标本为阳性对照，加Notch1和JAG1第1抗体，于湿盒内4℃冰箱过夜；染色结果判断参照阳性细胞百分比，以≤10%为无着色，分级为“-”，以11～50%为弱（淡黄），分级为“+”，以51～75%为中（棕黄），分级为“++”，以76～100%为强（棕褐），分级为“+++”[3]。
1.3 统计学分析
以SPSS12.5软件包对所获数据进行统计分析，以百分率（%）表示Notch1和JAG1蛋白表达，采用检验，标准以P<0.05为差异具有显著性。
2 结果
研究结果显示，LN分期N0期Notch1标准化系数中位数为0.58，N1期为1.05，比较差异具有显著性（P<0.05）；TNM分期Ⅰ期Notch1标准化系数中位数为0.57，Ⅱ期为1.05，Ⅲ期为0.59，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期的比较差异具有显著性（P<0.05），Ⅰ期与Ⅲ期比较差异并不显著（P>0.05）；乳腺癌病理学分级Ⅰ期Notch1标准化系数中位数为0.55，Ⅱ期为0.83，Ⅲ期为1.05，组间比较差异均具有显著性（P<0.05）。Notch1和JAG1表达率与各病理指标的关系如表1。
3 讨论
Notch信号通路由Notch受体、配体及CSA DNA结合蛋白等构成，可在多个物种中表达，其对细胞生长发育、分化增殖以及凋亡等会产生决定性的影响，相关体外和动物实验均已证实，活化的Notch信号可促使正常细胞转化为恶性细胞，这种异常表达情况在乳腺癌、血液系统肿瘤等实体瘤中均有发现，就乳腺癌而言，相关通路在其形成、发生和发展过程中产生重要影响[4]。
本次研究结果显示，LN分期和乳腺癌病理学分级比较差异均具有显著性（P<0.05）；TNM分期中Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期的比较差异具有显著性（P<0.05），Ⅰ期与Ⅲ期比较差异并不显著（P>0.05）。结合Notch1、JAG1表达率与各病理指标的关系可以得出，Notch信号相关通路在乳腺癌和增生性中的作用并不相同，Notch1和JAG1的异常表达均与乳腺癌存在内在关联，明确Notch信号相关通路的表达情况，有助于进一步探索Notch基因的表达与乳腺癌发生、发展的关系。
参考文献
[1]李兵，谢晓冬.乳腺癌相关信号转导通路的研究进展[J].临床肿瘤学杂志，2010，10（3）：277-279.
[2]万国兴，李锋，孙建平，等.miRNA-34a、Notch1与乳腺癌发生、发展的研究进展[J].临床与实验病理学杂志，2013，10（3）：1113-1115.
[3]刘兆国，朱智杰，周梁，等.Notch信号通路与肿瘤研究[J].中国药理学通报，2012，15（8）：1045-1048.
[4]裘铠杰，胡彦华，吴德全.Notch信号通路与肿瘤侵袭、转移的研究进展[J].胃肠病学和肝病学杂志，2014，11（3）：1362-1364.