目的 探讨通过RNA干扰技术沉默TIZ基因的表达对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生物学行为的影响.方法 设计3对特异性针对TIZ基因的小分子干扰RNA(siRNA),并转染入TIZ基因表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞中,采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术检测siRNA片段对TIZ基因的沉默率,筛选最佳沉默率的siRNA片段构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA-TIZ-573重组干扰质粒,采用脂质体转染法将重组干扰质粒转染入SKOV3细胞(sh-TIZ-573/SKOV3细胞),并设阴性对照细胞sh-NC/SKOV3、阳性对照细胞sh-GA/SKOV3.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长曲线,集落形成实验测定细胞生长能力,流式细胞仪检测细胞周期,细胞体外侵袭重建基膜实验、穿膜小室实验和体外黏附实验分别测定细胞体外侵袭、转移及黏附能力.结果 QRT-PCR技术检测显示,TIZ-573 siRNA片段下调TIZ基因表达的作用最明显,沉默率达62％,且成功构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA-TIZ-573重组干扰质粒并导入SKOV3细胞中使TIZ基因表达沉默.细胞生长曲线显示,TIZ基因表达沉默后的sh-TIZ-573/SKOV3细胞较对照细胞生长加快.sh-TIZ-573/SKOV3细胞在G0/G1期所占比例(34.9％)比sh-NC/SKOV3、sh-GA/SKOV3细胞少(分别为68.8％、63.4％),分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).细胞集落形成实验显示,sh-TIZ-573/SKOV3细胞的集落形成率[(89.1±4.6)％]高于sh-GA/SKOV3、sh-NC/SKOV3细胞[(60.8±4.9)％、(57.0±2.6)％],分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).sh-TIZ-573/SKOV3细胞的侵袭率、转移率和黏附率分别为(48.5±1.7)％、(53.6±3.4)％、(64.9±5.0)％,在TIZ基因沉默前后侵袭、转移和黏附能力无明显改变(P＞0.05).结论 下调TIZ基因的表达对卵巢癌细胞生长有一定的促进作用,其可能发挥抑癌基因的生物学作用。
TIZ基因表达下调对卵巢上皮性癌细胞生物学行为影响的体外实验研究
【摘 要】
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目的 探讨通过RNA干扰技术沉默TIZ基因的表达对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生物学行为的影响.方法 设计3对特异性针对TIZ基因的小分子干扰RNA(siRNA),并转染入TIZ基因表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞中,采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术检测siRNA片段对TIZ基因的沉默率,筛选最佳沉默率的siRNA片段构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA-TIZ-573重组干扰质粒,
【机 构】
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530021南宁,广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科,530021南宁,广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科,530021南宁,广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科,530021南宁,广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科,
【出 处】
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中华妇产科杂志
【发表日期】
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2012年47期
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